熒光壽命成像技術是如何應用在生物醫(yī)學中的?隨著近年來對蛋白及分子功能研究的不斷深入,科研工作者除對多色成像、鈣成像等功能成像的需求日漸增多之外,對熒光壽命成像的需求也逐漸增加,而熒光壽命成像能提供除熒光強度、熒光光譜信息之外的熒光分子的壽命信息,可用于分子間相互作用(FRET)、分子所處微環(huán)境的離子濃度(如Ca2+、pH)及細胞代謝水平的改變等測量,并可拆分光譜重疊的熒光染料及染料和自發(fā)熒光,還可以結合熒光相關光譜對單分子實現(xiàn)熒光壽命相關光譜FLCS的測量。熒光壽命成像擴展了傳統(tǒng)熒光成像的維度,是功能成像的理想工具,在生物醫(yī)學領域有廣闊的應用前景。熒光壽命顯微成像技術具有對生物大分子結構、動力學信息和分子環(huán)境等進行高分辨高精度測量的能力。湖南三維熒光壽命成像多少錢
熒光壽命檢測經(jīng)典方法為點對點的時間相關單光子計數(shù)(TCSPC),但由于過去檢測硬件的局限和復雜的使用而沒有被普遍地應用于科學研究。隨著技術的發(fā)展,在顯微鏡視野內進行超快速全像素熒光壽命信號采集的熒光壽命成像成為可能。熒光壽命成像提供了壽命分布的二維圖形視圖。該圖形視圖使任何觀察者都能快速區(qū)分和分離FLIM圖像中的不同壽命種群。相量FLIM分布的解釋很簡單。因為每個物種都有特定的相量,所以可以在單個像素內解析多個分子物種。佛山紅外熒光壽命成像批發(fā)熒光壽命成像可用于對皮膚病的診斷,對腔體病癥早期的臨床診斷。
熒光壽命成像FLIM所面臨的挑戰(zhàn):在數(shù)據(jù)處理上,由于曲線擬合迭代過程的需求,計算成本較其他成像方案更高。在成像原理上,熒光壽命受多種外界因素影響,這些因素包括分子相互作用、pH值、溫度和粘滯阻力等,很難對這些參數(shù)控制變量,使得測量熒光壽命存在交叉干擾問題。此外,與普通光學顯微技術類似,介質光散射影響成像信噪比及空間分辨率,成像深度受到限制。FLIM已經(jīng)在系統(tǒng)裝置、熒光探針和數(shù)據(jù)處理算法等方面得到了較快的發(fā)展,這也使得熒光壽命成像FLIM在對細胞微環(huán)境成像和生物代謝監(jiān)測發(fā)揮出不可替代的作用。
熒光壽命成像和熒光光盤有什么區(qū)別?與熒光光譜一樣,熒光壽命也是熒光物質的一種內在特有性質,不受熒光物質濃度、激發(fā)光強度等因素的影響。熒光壽命成像能在不受熒光強度影響因素影響的條件下,在納米分辨率水平對蛋白互作進行研究,或者通過 FRET 探針研究分子環(huán)境變化,更重要的是其測量數(shù)據(jù)準確性高、易重復。通過熒光壽命成像還可以對樣本所處的微環(huán)境進行檢測、對樣品組份進行分離等等。在傳統(tǒng)的熒光強度和熒光光譜兩個維度的基礎上,又增加了熒光壽命這一新的成像維度,大幅度拓展了該系統(tǒng)的應用范圍。熒光壽命成像(FLIM)可用于測量分子環(huán)境參數(shù),通過熒光共振能量轉移進行的蛋白質相互作用。
熒光壽命成像具有什么優(yōu)勢?熒光壽命成像的優(yōu)勢:通過熒光強度成像可以獲得熒光分子的空間分布,較為直接和簡便,但是當熒光分子具有相似的頻譜特性,或是同樣的熒光分子在不同環(huán)境下時,依賴強度進行成像的方案便無法準確反映信息。與基于光強的成像方式不同,F(xiàn)LIM成像適用于測量熒光分子環(huán)境的變化,或是測量分子的運動情況。其結果與熒光分子濃度無關,且不受影響光強的光散射或是光吸收影響,可以精確測量熒光淬滅過程,對生物分子微環(huán)境進行定量測量。影響熒光壽命成像測量的因素:高濃度樣品,高濃度的分子之間相互作用而發(fā)生活性阻礙現(xiàn)象。熒光壽命成像多少錢
熒光壽命成像被普遍地應用于生物學研究及臨床診斷等領域。湖南三維熒光壽命成像多少錢
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