寧夏高脂高糖動物模型技術

糖尿病足大鼠模型【目的】構建糖尿病足大鼠模型；【材料】1、材料：STZ藥物、注射器、檸檬酸、檸檬酸三鈉；2、試劑配制：1）檸檬酸納緩沖液配制：A液十B液=1:，PH=；A液:檸檬酸mL；B液:朽檬酸三納2）STZ液配制:55mg/kg（避光，現配現用10min內注射)；3、糖尿病模型構建方法：1）大鼠術前禁食12h；2）按55ug/g注射.連續(xù)3天注射，對照組注射檸檬酸緩沖液，造模組注射STZ液，注射后不禁水、禁食2-4h；3）STZ注射結束5天后空腹測血糖，血糖值高于12mmol/L選入實驗組；【方法】方法一：細菌懸浮液造模1、糖尿病模型大鼠第二周至第三周時，后足背側注射l0ul金黃色葡萄球菌懸浮液，造成糖尿病肢端的動物模型；2、后續(xù)觀察傷口情況；方法二：皮膚劃傷造模1、三周后糖尿病大鼠后足足背手術剪做一個圓形皮膚創(chuàng)口，直徑5mm；2、后續(xù)每日觀察傷口情況，作好記錄。面神經受損而致面部表情肌群的運動功能障礙,對患者的心理和日常生活造成很大的影響。寧夏高脂高糖動物模型技術

導師給我們上的堂課往往就是交代我們要詳細記好實驗記錄，只要是和實驗相關的，無論是照片，還是文字，必須要及時事無巨細地詳細記錄。并且要備份好每一份實驗記錄。我個人一般喜歡每天及時地記在「科研實驗記錄本」上面，然后拍照掃描成電子版儲存在電腦和云端。時間規(guī)劃首先，個人是不贊同每天24小時泡在實驗室的，高效率是關鍵。建議提前一天規(guī)劃好第二天需要做的事情，按照代辦事項的格式逐條列出，哪一個時間段需要做什么事情？這樣的好處有兩點，一個是自己提前把時間預約好，可以留出足夠的時間休息和娛樂；另一個是在執(zhí)行計劃的時候往往會有一種時間緊迫感，辦事起來往往更高效且不會遺漏。總之，預實驗就是迷你版正式實驗，希望小伙伴們在進行預實驗的時候一定要盡可能地準備周全，這樣才能快的推進正式實驗。湖南腦定位動物模型手術急性肺損傷(acute lung injury，ALI)。

伴vonFreyhairs檢測）熱板法大/小鼠甩尾法大/小鼠熱輻射致痛法大/小鼠壓痛法大/小鼠VonFreyhairs法大/小鼠醋酸扭體法小鼠福爾馬林致痛法大/小鼠佐劑CFA引起的疼痛大/小鼠角叉菜膠致痛模型大/小鼠LPS誘導痛模型大/小鼠脊神經選擇性結扎（L5/L6）大/小鼠坐骨神經分枝選擇性損傷模型（SNI）大/小鼠糖尿病疼痛、切口疼痛，性疼痛模型大/小鼠抗癡呆小鼠獲得性記憶障礙模型（6道小鼠跳臺視屏分析系統(tǒng)）小鼠小鼠記憶鞏固不良模型（6道小鼠跳臺視屏分析系統(tǒng)）小鼠小鼠記憶再現障礙模型（6道小鼠避暗視屏分析系統(tǒng)）小鼠小鼠明暗箱法（4道小鼠明暗箱視屏分析系統(tǒng)）小鼠大鼠獲得性記憶障礙模型（Morris水迷宮視屏分析系統(tǒng)）大鼠小鼠腦內乙酰膽堿酯酶活力測定小鼠D-半乳糖致小鼠癡呆模型小鼠新物體識別實驗大鼠APP/PS1雙轉基因小鼠模型（Morriswatermaze,CognitionWall）轉基因小鼠體外實驗細胞水平。

轉基因小鼠對黑色素瘤發(fā)生的分子途徑的理解有重要意義。此外，轉基因小鼠是可靠且可重現的模型，用來評估受損基因對黑色素瘤生物學的影響。應用：基因工程小鼠模型可用于研究特定基因組改變在黑色素瘤的發(fā)生和發(fā)展的重要性及藥物的靶向。1Lum－/－基因敲除小鼠Lumican是一種富含亮氨酸的小蛋白聚糖(smallleucine-richproteoglycan，SLRP)，為膠原原纖維形成的關鍵調節(jié)劑。黑色素瘤中Lumican表達降低與浸潤相關。方法：有研究者利用BamHI建立的克隆衍生物導入胚胎干細胞，建立Lum－/－轉基因小鼠。該模型可提供與發(fā)生和轉移相關機制及可見變的進展，以及確定負責的黑色素瘤進展的基因。2Tyr::N-RasQ61K轉基因小鼠方法：有研究者使用突變的人N-ＲasQ61K和SV40剪接以及聚腺苷酸化序列生成Tyr::N-ＲasQ61K構建體，并注射到卵母細胞中，建立Tyr::N-ＲasQ61K轉基因小鼠。3BrafV600E轉基因小鼠模型有研究者使用LoxP-stop-LoxP(LSL)/Cre重組酶技術從內源性Braf基因中誘導BrafV600E表達，建立BrafV600E轉基因黑色素瘤小鼠模型?？偨Y目前已有三種不同的黑色素瘤小鼠模型，但由于實驗動物與人類基因組、基因調控、細胞類型、結構與組成等方面是有一定差別。惡性黑色素瘤是起源于神經嵴的黑色素細胞惡性。

擴增產物為。其中a2,3,6,9,10,b1為陽性。擴增3’端長臂使用引物：neof:5’-cgccttcttgacgagttcttctga-3’；gm3’lrr:5’-ggtgcttgagtagtgttgaatctcagtggacca-3’結果見圖3中b，擴增產物為。其中：a2,3,6,9,10,b6,9,es1g,es2g為陽性雜合子，+/+為野生型對照。5將步驟4得到的雜合子小鼠動物與轉基因鼠flper鼠交配繁育，得到gm20541基因條件性敲除雜合子小鼠；6將步驟5得到的gm20541基因條件性敲除雜合子小鼠相互交配繁育，得到gm20541基因條件性敲除純合子小鼠；7將步驟6得到的gm20541基因條件性敲除純合子動物與轉six3-cre基因動物交配，得到視網膜前體細胞gm20541基因敲除小鼠。轉基因鼠flper鼠購自美國捷克森實驗室(品系名稱：(rosa)26sortm1(flp1)dym/rainj)。six3-cre轉基因小鼠(mgi：3574771)由美國德克薩斯大學安德森中心贈送。six3是一個前腦腹側和視網膜前體細胞的標志性轉錄因子，其特異性驅動cre基因在視網膜前體細胞表達，cre蛋白可以進入細胞核，識別基因組上loxp位點，實現基因敲除。基因敲除小鼠鑒定步驟：對上述視網膜前體細胞敲除gm20541基因的小鼠的基因型鑒定，操作如下：(1)剪小鼠尾梢少許組織樣本，置于干凈的；(2)在離心管中加入100μl裂解液。膽管結扎致肝膽管性肝硬化大鼠模型。外包動物模型飼養(yǎng)

可提供專業(yè)的大鼠小鼠動物疾病模型技術，包含心血管系統(tǒng)神經系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、生殖、泌尿系統(tǒng)、成瘤系統(tǒng)等。寧夏高脂高糖動物模型技術

再向老師、師兄師姐學習經驗和技術，如果實驗平臺的儀器需要提前預約，建議提前規(guī)劃好使用的時間。反復總結尋找答案在整個預實驗的過程中可能會出現很多問題。比如造模效果欠佳、灌胃操作不當、腹腔注射操作失誤、物使用不當等引起動物死亡。每遇到問題都需要自己想辦法解決，可以從導師、師兄師姐、文獻、貼吧、視頻教程等找到答案。比如筆者曾遇到同樣的物給藥，發(fā)現有的大鼠麻醉得很深，有的大鼠還活蹦亂跳，在反復嘗試調整濃度，給藥劑量，更換麻醉方式，后來才發(fā)現是動物體重秤的準度有問題，導致體重秤得不準。因此，需要自己反復琢磨到底是實驗過程中哪一個環(huán)節(jié)出現問題，逐一排除。也要求在每一個實驗步驟需要標準化，統(tǒng)一化，盡可能的排除干擾因素，這樣方便在遇到問題快的找到答案。同時，建議每日總結，大到動物死亡原因分析，小到灌胃操作耗時多長時間。建議反復總結出每天實驗的優(yōu)缺點。做任何一個操作之前，建議提前腦海中反復模擬，準備好相關工具和試劑，避免臨用之際缺少藥的，影響實驗操作節(jié)奏和個人心情。筆者曾經灌胃操作的時候發(fā)現藥物竟然忘帶了，只好重新回實驗室準備，那真叫一個郁悶。仔細記錄每日實驗過程無論是碩士還是博士。寧夏高脂高糖動物模型技術