上海高脂高糖動物模型構(gòu)建

四氯化碳誘導(dǎo)急性肝損傷大鼠模型【方法】1、將大鼠隨機(jī)分配至2組中，每組5只，正常喂食喂水7d后進(jìn)行試驗；2、大鼠體重為200g±10g，按組別給予藥物：生理鹽水組每只腹腔注射1ml生理鹽水、模型組每只按5ml/kg背部皮下注射四氯化碳3、各組藥物注射24h后取材進(jìn)行相關(guān)檢測（注：注射前按比例混合四氯化碳：橄欖油=1：）【評定】給予四氯化碳后TP含量下降，ALT和AST含量上升【檢測】生理鹽水組肝索結(jié)構(gòu)清晰，血管內(nèi)無淤血，血管周圍無炎癥病灶，肝小葉結(jié)構(gòu)清晰；給予四氯化碳后肝索排列紊亂，結(jié)構(gòu)不清，存在大量壞死區(qū)域且肝索結(jié)構(gòu)消失，有大小不一的空泡結(jié)構(gòu)，多數(shù)血管內(nèi)有淤血并伴有粉染蛋白樣物質(zhì)，血管周圍有炎癥反應(yīng)灶，少量紅細(xì)胞滲出；西維來司鈉介入后肝索排列不清晰，存在部分壞死區(qū)域且肝索結(jié)構(gòu)消失，有大小不一的空泡結(jié)構(gòu)，少數(shù)血管內(nèi)有淤血并伴有粉染蛋白樣物質(zhì)，血管周圍有炎癥反應(yīng)灶，極少量紅細(xì)胞滲出。膽管結(jié)扎致肝膽管性肝硬化大鼠模型。上海高脂高糖動物模型構(gòu)建

通過無極調(diào)控微負(fù)壓裝置來調(diào)節(jié)飼養(yǎng)倉2內(nèi)的壓力，通過高原低氧環(huán)境模擬裝置來調(diào)整飼養(yǎng)倉2內(nèi)氧含量，當(dāng)需要燈光時，通過高原光照環(huán)境模擬裝置15開啟紫外燈以及照明燈，通過高原溫度環(huán)境模擬裝置16來進(jìn)行調(diào)溫，通過高原濕度環(huán)境模擬裝置17調(diào)節(jié)飼養(yǎng)倉2內(nèi)濕度，通過動物行為學(xué)遠(yuǎn)程觀察單元18可以監(jiān)控動物的行為，飼養(yǎng)倉2內(nèi)若干代謝籠3配備投料斗8、飲水瓶9可以進(jìn)行攝食量、飲水量測定，聚糞斗10、尿液排出口11、糞便排出口12便于模型動物的尿液和糞便常規(guī)檢測，并且本系統(tǒng)設(shè)置的多個代謝籠3可以同時培養(yǎng)多種動物，造模動物多。實(shí)施例2在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上提供的一種高原性人類疾病模型制備環(huán)境模擬系統(tǒng)，所述無極調(diào)控微負(fù)壓裝置包括進(jìn)風(fēng)系統(tǒng)13、排風(fēng)系統(tǒng)14和霍尼威爾或西門子調(diào)控模塊，所述進(jìn)風(fēng)系統(tǒng)13設(shè)置在功能設(shè)備集成底座1內(nèi)，所述排風(fēng)系統(tǒng)14設(shè)置在飼養(yǎng)倉2頂部。本實(shí)施例的工作原理：本系統(tǒng)進(jìn)風(fēng)系統(tǒng)13內(nèi)集成有進(jìn)風(fēng)風(fēng)機(jī)單元、排風(fēng)系統(tǒng)14集內(nèi)成有排風(fēng)風(fēng)機(jī)單元。由于飼養(yǎng)倉2能夠密封，通過改變風(fēng)機(jī)風(fēng)量的方式來調(diào)節(jié)壓差，進(jìn)風(fēng)風(fēng)機(jī)單元和排風(fēng)風(fēng)機(jī)單元均與飼養(yǎng)倉2連通，通過調(diào)節(jié)進(jìn)、排風(fēng)的壓力差值，系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境能夠形成(～)微負(fù)壓，系統(tǒng)配置霍尼威爾或西門子調(diào)控模塊。云南哪里有動物模型四氯化碳誘導(dǎo)急性肝損傷大鼠模型。

一種是用beta巰基乙醇打開蛋白質(zhì)分子二硫鍵的，另一種是用DTT(二硫蘇糖醇)。兩者的作用是一樣的，但特點(diǎn)不一樣，前者更容易與氧氣反應(yīng)，穩(wěn)定性比后者差，如果在常溫下暴露在空中，前者只能維持24小時的活性，后者卻可以維持7天左右。所以該如何選擇?如果是蛋白樣品較少，跑幾次就可以用完的樣品，這時選擇beta巰基乙醇。如果樣品很多，計劃跑上幾十次的，優(yōu)先選擇DTT,建議變性后分裝保存。二、SDS-PAGE凝膠配制1、配膠前準(zhǔn)備首先強(qiáng)調(diào)一下，一塊好的膠是跑好蛋白的前提，所以這個環(huán)節(jié)也不容忽視。玻璃板的選擇，一種是1毫米厚度的，另一種是，這個厚度選擇也是有講究的，如果上樣體積小于10微升，優(yōu)先選1毫米，否則選。原因是什么?答案在轉(zhuǎn)膜部分揭曉。還有分離膠的濃度也要選擇適合的。然后玻璃板和梳子要洗干凈，晾干。裝板，注意厚板和薄板的底部要對齊，否則會漏膠。加制膠的各成分前，要觀察液體是否有沉淀，有沉淀的盡量不要用。2、制膠按配方說明依次加入各組分，加完SDS后先簡單手動搖勻幾下，然后迅速加入過硫酸銨和TEMED,搖勻，緊接著就灌膠。然后我習(xí)慣用95%的酒精壓膠，我也用過純水，感覺純水壓沒那么好，由于水的密度較大，會把分界處的膠壓得膨大。

靜置25分鐘后把酒精倒干，用吸水紙吸出多余的酒精，然后配壓縮膠，同樣的操作，關(guān)鍵是梳子要插得快，要小心梳子下產(chǎn)生氣泡，然后靜置30分鐘。如果是當(dāng)天跑膠，我會等上層膠凝2個小時再用，但要注意防干燥縮水，可以在一個小時的時候沿著梳子上緣加點(diǎn)電泳液。所以我一般提前一晚制膠，泡于純水或者電泳液里置于4度冰箱暫存。三、蛋白電泳1、上樣前準(zhǔn)備把膠組裝到電泳芯上，注意密閉性(否則漏液)，如果內(nèi)槽漏液就不是勻強(qiáng)電場了，條帶可能就不是一條直線。然后內(nèi)槽倒?jié)M電泳液，拔梳子，這一步要小心，梳子要兩邊一起緩緩?fù)习纬?，然后觀察泳道內(nèi)有無脫落的膠?；蛘吣z絲，有的話用1毫升注射器吸出。然后從冰箱取出蛋白樣品，解凍。準(zhǔn)備振蕩器。2、上樣和電泳注意，上樣后蛋白會開始慢慢在膠中彌散，所以上樣越快越好。我習(xí)慣先上蛋白Marker,再上蛋白樣品，蛋白上樣前確保樣品完全解凍和充分振蕩(推薦使用振蕩器振蕩)，吸的時候沒有拉絲即可，建議上樣分鐘把樣品從冰上取出來，不然樣品中SDS可能會結(jié)晶析出，從而影響電泳效果。上層膠80V25分鐘，下層膠120V65分鐘。四、轉(zhuǎn)膜1、轉(zhuǎn)膜前準(zhǔn)備我會在電泳結(jié)束0分鐘準(zhǔn)備，把轉(zhuǎn)膜液配好置于4度冰箱預(yù)冷，然后裁膜，準(zhǔn)備轉(zhuǎn)膜裝置。C57BL/6成年鼠肺部通過呼吸機(jī)過量通氣損傷模型的建立；

糖尿病足大鼠模型【目的】構(gòu)建糖尿病足大鼠模型；【材料】1、材料：STZ藥物、注射器、檸檬酸、檸檬酸三鈉；2、試劑配制：1）檸檬酸納緩沖液配制：A液十B液=1:，PH=；A液:檸檬酸mL；B液:朽檬酸三納2）STZ液配制:55mg/kg（避光，現(xiàn)配現(xiàn)用10min內(nèi)注射)；3、糖尿病模型構(gòu)建方法：1）大鼠術(shù)前禁食12h；2）按55ug/g注射.連續(xù)3天注射，對照組注射檸檬酸緩沖液，造模組注射STZ液，注射后不禁水、禁食2-4h；3）STZ注射結(jié)束5天后空腹測血糖，血糖值高于12mmol/L選入實(shí)驗組；【方法】方法一：細(xì)菌懸浮液造模1、糖尿病模型大鼠第二周至第三周時，后足背側(cè)注射l0ul金黃色葡萄球菌懸浮液，造成糖尿病肢端的動物模型；2、后續(xù)觀察傷口情況；方法二：皮膚劃傷造模1、三周后糖尿病大鼠后足足背手術(shù)剪做一個圓形皮膚創(chuàng)口，直徑5mm；2、后續(xù)每日觀察傷口情況，作好記錄。缺血性腦血管病(ICVD)是威脅人類健康與生存的主要疾病之一。西藏大鼠動物模型造模

IgA腎病小鼠模型IgA 腎病是常見的原發(fā)性腎小球疾病,約占原發(fā)性腎小球疾病的 1/3。上海高脂高糖動物模型構(gòu)建

擴(kuò)增產(chǎn)物為。其中a2,3,6,9,10,b1為陽性。擴(kuò)增3’端長臂使用引物：neof:5’-cgccttcttgacgagttcttctga-3’；gm3’lrr:5’-ggtgcttgagtagtgttgaatctcagtggacca-3’結(jié)果見圖3中b，擴(kuò)增產(chǎn)物為。其中：a2,3,6,9,10,b6,9,es1g,es2g為陽性雜合子，+/+為野生型對照。5將步驟4得到的雜合子小鼠動物與轉(zhuǎn)基因鼠flper鼠交配繁育，得到gm20541基因條件性敲除雜合子小鼠；6將步驟5得到的gm20541基因條件性敲除雜合子小鼠相互交配繁育，得到gm20541基因條件性敲除純合子小鼠；7將步驟6得到的gm20541基因條件性敲除純合子動物與轉(zhuǎn)six3-cre基因動物交配，得到視網(wǎng)膜前體細(xì)胞gm20541基因敲除小鼠。轉(zhuǎn)基因鼠flper鼠購自美國捷克森實(shí)驗室(品系名稱：(rosa)26sortm1(flp1)dym/rainj)。six3-cre轉(zhuǎn)基因小鼠(mgi：3574771)由美國德克薩斯大學(xué)安德森中心贈送。six3是一個前腦腹側(cè)和視網(wǎng)膜前體細(xì)胞的標(biāo)志性轉(zhuǎn)錄因子，其特異性驅(qū)動cre基因在視網(wǎng)膜前體細(xì)胞表達(dá)，cre蛋白可以進(jìn)入細(xì)胞核，識別基因組上loxp位點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)基因敲除?；蚯贸∈箬b定步驟：對上述視網(wǎng)膜前體細(xì)胞敲除gm20541基因的小鼠的基因型鑒定，操作如下：(1)剪小鼠尾梢少許組織樣本，置于干凈的；(2)在離心管中加入100μl裂解液。上海高脂高糖動物模型構(gòu)建