江蘇內(nèi)毒素檢測方法驗證

來源： 發(fā)布時間：2025-10-07

湖州申科建立了標準化的低內(nèi)毒素回收（LER）技術服務流程，全周期支撐內(nèi)毒素檢測優(yōu)化：7 個自然日內(nèi)完成客戶溝通與 LER 確認，用天然鱟、重組鱟等方法檢測并出具報告；60 個自然日開展方法開發(fā)，分析 LER 成因（如螯合劑、蛋白質(zhì) IP）并研究去掩蔽方案；30 個自然日進行 HTS 驗證，完成 3 批 LER 實驗與干擾實驗，交付穩(wěn)定試劑盒、操作規(guī)程及培訓；再協(xié)助方法轉(zhuǎn)移與 cGMP 驗證。流程每環(huán)節(jié)均圍繞內(nèi)毒素檢測展開，確保企業(yè)高效解決 LER 問題，滿足法規(guī)要求。
細菌內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁脂多糖，細菌死亡裂解釋放，微量級即致人體發(fā)熱、休克等威脅。江蘇內(nèi)毒素檢測方法驗證

江蘇內(nèi)毒素檢測方法驗證,內(nèi)毒素檢測

樣品中的脂質(zhì)體與表面活性劑，會通過不同機制干擾內(nèi)毒素檢測，需結合基質(zhì)特性選擇處理方式。脂質(zhì)體的干擾體現(xiàn)在兩方面：一是脂質(zhì)雙分子層會包裹內(nèi)毒素，使其無法與鱟試劑接觸，導致假陰性；二是脂質(zhì)體的膠體性質(zhì)會干擾凝膠形成（凝膠法）或光度信號讀取（濁度 / 顯色法）。針對完整脂質(zhì)體制劑，可先用生理鹽水稀釋降低脂質(zhì)體濃度，減少包裹作用；若需徹底釋放內(nèi)毒素，還可使用 DMSO、乙醇或甲醇等溶劑裂解脂質(zhì)體，暴露被包裹的內(nèi)毒素。表面活性劑的干擾則源于其對物質(zhì)結構的改變：既可能破壞內(nèi)毒素的聚集體結構，影響其活性；又可能導致鱟試劑中蛋白質(zhì)變性，抑制反應。對此，可通過內(nèi)毒素檢查用水或生理鹽水稀釋樣品，降低表面活性劑濃度，消除其對結構的破壞作用。這些針對性處理能有效解決脂質(zhì)體與表面活性劑的干擾，確保內(nèi)毒素檢測結果真實可靠。
江蘇生物制品內(nèi)毒素檢測抗干擾方案湖州申科生物提供重組級聯(lián)方法的技術轉(zhuǎn)移服務，含方法驗證報告，助力內(nèi)毒素檢測方法平穩(wěn)切換。

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β- 葡聚糖是鱟試劑（LAL）檢測內(nèi)毒素的常見干擾物，可活化 LAL 中的 G 因子通路，導致假陽性結果。干擾多見于含植物源原料的樣品（如中藥注射劑）、生物發(fā)酵產(chǎn)物或環(huán)境真菌污染的樣品。消除方法包括：使用特異性 LAL 試劑（如添加葡聚糖抑制劑的 LAL），其只對內(nèi)毒素敏感而不受 β- 葡聚糖影響；采用加熱處理（如 80℃加熱 10 分鐘）破壞 β- 葡聚糖結構；或通過親和層析去除樣品中的 β- 葡聚糖。檢測時需設置 β- 葡聚糖陽性對照，若對照反應陽性而內(nèi)毒素標準品無反應，表明存在干擾，需優(yōu)化前處理步驟后重新檢測。

湖州申科生物凝膠法鱟試劑是根據(jù)凝集反應所形成凝膠的堅實程度來限量檢測樣本中細菌內(nèi)毒素含量。常用于人用和動物用注射藥物、生物制品及醫(yī)療器械等領域中定性或半定量地測定細菌內(nèi)毒素含量。本品為海洋生物鱟的血液變形細胞溶胞物的冷凍干燥制品,內(nèi)含能被微量細菌內(nèi)毒素活化的凝固酶原(Proclotting enzyme)和凝固酶蛋白(Coagulogen)。在適宜的條件下(溫度、pH值及無干擾物質(zhì)),細菌內(nèi)毒素能活化鱟試劑中的凝固酶原,使備試劑產(chǎn)生凝集反應形成凝膠。本品可以快速、準確地檢測樣品中的內(nèi)毒素水平，提高實驗效率,保障實驗結果的可靠性。
內(nèi)毒素指示劑（ECV）是凍干脂多糖，監(jiān)測制藥工藝高溫除內(nèi)毒素效果。

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湖州申科針對 LER 提供多平臺內(nèi)毒素檢測解決方案，適配不同成因的 LER 問題：一是鱟試劑配套增強劑，通過添加分散劑、過量二價陽離子，改善 LPS 聚集體狀態(tài)，提升回收率；二是重組鱟試劑（rCR），無 G 因子干擾，完全模擬天然鱟級聯(lián)反應，靈敏度達 0.005EU/mL，易與天然方法橋接；三是重組 C 因子（rFC），靈敏度 0.005-5EU/mL，性狀穩(wěn)定，適配特定基質(zhì)；四是 單核細胞活化反應測定（MAT)法，通過檢測 IL-6 覆蓋全熱原，不受 LPS 結構變化影響；五是質(zhì)譜技術，驗證基質(zhì)殘留對檢測的干擾。多平臺協(xié)同確保內(nèi)毒素檢測準確可靠。
內(nèi)毒素檢測方法學驗證需覆蓋線性、精密度，確保不同批次檢測結果穩(wěn)定。浙江醫(yī)療器械內(nèi)毒素檢測技術升級

內(nèi)毒素檢測假陰性多因樣品抑制，梯度稀釋結合加標試驗可定位偏差原因。江蘇內(nèi)毒素檢測方法驗證

醫(yī)療器械（如輸液器、注射器、植入式設備）若攜帶內(nèi)毒素，可能通過血液、組織接觸引發(fā)異常反應或炎癥反應。其檢測需遵循 “模擬臨床使用” 原則：采用浸提液（如 0.9% 氯化鈉溶液或注射用水）在 37℃±1℃下浸提器械表面內(nèi)毒素，再通過 LAL 或 rFC 法檢測浸提液。不同器械的內(nèi)毒素限值差異明顯：一次性輸液器需≤0.5 EU/device，植入式心臟瓣膜則要求更嚴格（≤0.06 EU/device）。檢測時需注意器械材質(zhì)對浸提效率的影響，如塑料類器械可能吸附內(nèi)毒素，需優(yōu)化浸提時間（通?！? 小時）或采用超聲輔助提取，確保殘留內(nèi)毒素被充分檢出。
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