江蘇高效內(nèi)毒素檢測方法驗(yàn)證

來源： 發(fā)布時間：2025-10-12

內(nèi)毒素檢測中，樣品中的蛋白質(zhì)或酶的修飾作用易破壞鱟試劑的反應(yīng)體系，導(dǎo)致檢測結(jié)果失真。鱟試劑檢測內(nèi)毒素的本質(zhì)是一系列絲氨酸蛋白酶的酶促放大過程，若樣品中存在氧化劑、抗氧化劑、蛋白水解劑或?qū)Ｒ皇Щ顒?，會直接滅活反?yīng)所需的酶；而乙醇、苯酚等物質(zhì)則會導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性，同樣抑制反應(yīng)進(jìn)程。例如，某些生物制品中含有的蛋白水解酶，可能提前降解鱟試劑中的蛋白酶，使內(nèi)毒素?zé)o法被正常檢測。為消除這類干擾，需優(yōu)先限制樣品中抑制物的含量：可采用內(nèi)毒素檢查用水稀釋樣品，降低抑制物濃度；對耐熱的抑制物（如部分蛋白水解酶），可通過加熱滅活處理（如 56℃孵育 30 分鐘）破壞其活性；若樣品基質(zhì)復(fù)雜，還可使用超濾技術(shù)分離內(nèi)毒素與干擾蛋白質(zhì)，避免修飾作用對酶促反應(yīng)的影響，保障內(nèi)毒素檢測結(jié)果的可靠性。
內(nèi)毒素檢測方法多樣，影響因素及實(shí)驗(yàn)干擾較多，包括實(shí)驗(yàn)操作步驟、樣品處理等方面。江蘇高效內(nèi)毒素檢測方法驗(yàn)證

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血液制品（如白蛋白、免疫球蛋白、凝血因子）來源于人血漿，內(nèi)毒素污染風(fēng)險(xiǎn)高，且基質(zhì)中含大量蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等干擾物質(zhì)，檢測難度較大。傳統(tǒng) LAL 法易受血漿蛋白抑制，需通過預(yù)處理去除干擾：如采用三氯乙酸沉淀蛋白、超速離心分離脂質(zhì)，或使用特定去干擾試劑（如內(nèi)毒素提取試劑）。此外，血液制品內(nèi)毒素限值較低，需選用高靈敏度檢測方法（如動態(tài)顯色法，LOD=0.005 EU/mL）。檢測過程中需嚴(yán)格區(qū)分 “內(nèi)源性內(nèi)毒素”（血漿中天然存在）與 “外源性污染”，通過工藝優(yōu)化（如巴氏滅活、納米膜過濾）降低外源性內(nèi)毒素殘留，保障臨床用藥安全。
北京原料藥內(nèi)毒素檢測常見問題分析繪制內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)曲線時，起始濃度需統(tǒng)一為 1000EU/mL，避免稀釋誤差。

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檢測細(xì)菌內(nèi)毒素的堂試劑方法，是一個生物反應(yīng)過程，受到很多因素的干擾。在一個供試品的檢測方法固定下來之前，為了得到準(zhǔn)確的結(jié)果，必須要了解供試品與鱟試劑之間的相互關(guān)系。供試品中的成分往往非常復(fù)雜，而且會干擾試驗(yàn)檢測系統(tǒng)的功能。很多干擾的機(jī)理，并不是非常清楚。但是業(yè)界比較能夠接受的理論是，如果供試品中某些因子影響了鱟試劑中蛋白的表達(dá)功能，則被認(rèn)為是干擾作用（Inhibition/Enhancement，V/E）。干擾作用產(chǎn)生的因素較多，一般包括試劑因素（鱟試劑、內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品）供試品因素（pH值、溫度、離子強(qiáng)度、濃度、水溶性、黏度、可發(fā)生鱟試劑反應(yīng)的非內(nèi)毒素雜質(zhì)）和實(shí)驗(yàn)因素（試驗(yàn)器皿、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水、鱟試劑抗干擾能力）等。

醫(yī)療器械（如輸液器、注射器、植入式設(shè)備）若攜帶內(nèi)毒素，可能通過血液、組織接觸引發(fā)異常反應(yīng)或炎癥反應(yīng)。其檢測需遵循 “模擬臨床使用” 原則：采用浸提液（如 0.9% 氯化鈉溶液或注射用水）在 37℃±1℃下浸提器械表面內(nèi)毒素，再通過 LAL 或 rFC 法檢測浸提液。不同器械的內(nèi)毒素限值差異明顯：一次性輸液器需≤0.5 EU/device，植入式心臟瓣膜則要求更嚴(yán)格（≤0.06 EU/device）。檢測時需注意器械材質(zhì)對浸提效率的影響，如塑料類器械可能吸附內(nèi)毒素，需優(yōu)化浸提時間（通?！? 小時）或采用超聲輔助提取，確保殘留內(nèi)毒素被充分檢出。
細(xì)菌內(nèi)毒素檢測中，rCR 對高蛋白（如單抗、FBS）、細(xì)胞培養(yǎng)上清等特殊樣本適配性好。

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當(dāng)實(shí)驗(yàn)室更換內(nèi)毒素檢測方法或更換試劑供應(yīng)商時，需進(jìn)行方法比對與橋接驗(yàn)證。比對實(shí)驗(yàn)需選取至少 3批代表性樣品，分別用新舊方法檢測，計(jì)算結(jié)果相關(guān)性（如相關(guān)系數(shù) R2≥0.95）和偏差（≤20%）。橋接驗(yàn)證還需評估新方法的特異性、靈敏度是否與舊方法一致，如確認(rèn)對高風(fēng)險(xiǎn)樣品（如含 β- 葡聚糖的樣品）的抗干擾能力相當(dāng)。若方法變更涉及法規(guī)申報(bào)產(chǎn)品，需將驗(yàn)證數(shù)據(jù)納入申報(bào)資料，證明變更后方法仍能有效控制內(nèi)毒素風(fēng)險(xiǎn)，符合 FDA、NMPA 等監(jiān)管機(jī)構(gòu)對方法變更的合規(guī)性要求。
湖州申科內(nèi)毒素檢測服務(wù)含低內(nèi)毒素回收，通過不同樣品前處理方式搭配多種檢測方法，較大程度解決LER問題。上海重組蛋白內(nèi)毒素檢測LER現(xiàn)象

內(nèi)毒素指示劑（ECV）是凍干脂多糖，監(jiān)測制藥工藝高溫除內(nèi)毒素效果。江蘇高效內(nèi)毒素檢測方法驗(yàn)證

如何準(zhǔn)備樣品進(jìn)行內(nèi)毒素檢測呢？測試前，需要根據(jù)樣品實(shí)際情況進(jìn)行樣本前處理。大多數(shù)樣品只需要稀釋，使用內(nèi)毒素檢測試劑盒進(jìn)行測試即可。如果樣品有蛋白酶干擾并導(dǎo)致假陽性結(jié)果，建議對樣品稀釋并70°C加熱5-15分鐘進(jìn)行熱滅活處理。如需要，可以對滅活樣品進(jìn)行進(jìn)一步稀釋后檢測。如果樣品可能含有受β-葡聚糖，建議使用抗增液。β-葡聚糖可能來自酵母和纖維素材料。如果樣品中因含有內(nèi)毒素結(jié)合物而存在抑制，可以嘗試使用分散劑。
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