上海非動物源熱原檢測體系

來源： 發(fā)布時間：2025-11-11

湖州申科生物MAT試劑盒配套的即用型細胞，需嚴格遵循解凍與使用規(guī)范，避免細胞活性下降影響熱原檢測結(jié)果。首先，解凍操作需快速：從液氮罐或 - 80℃冰箱取出細胞后，立即放入 37℃水浴鍋快速解凍（約 1-2 分鐘），避免緩慢解凍導(dǎo)致細胞內(nèi)形成冰晶，損傷細胞膜；解凍后需立即取出，用 75% 酒精擦拭管外壁消毒，防止污染。其次，細胞解凍后需一次性使用完畢，不建議按量添加培養(yǎng)基或添加劑后分次使用—即用型細胞經(jīng)工藝優(yōu)化，活性與濃度已預(yù)調(diào)，分次使用會導(dǎo)致細胞狀態(tài)不均（如部分細胞活化、部分休眠），影響熱原反應(yīng)性。使用時需嚴格按說明書操作：將解凍后的細胞直接加入含樣品的微孔板中，無需額外洗滌或稀釋，若樣品為高濃度基質(zhì)，可提前用無熱原培養(yǎng)基稀釋樣品（不超 MVD），但細胞不可稀釋。此外，解凍后的細胞需在 30 分鐘內(nèi)完成加樣，避免室溫放置過久導(dǎo)致細胞活性下降，若無法及時加樣，需置于 37℃培養(yǎng)箱暫存，但不超過 1 小時，確保細胞用于熱原檢測時處于較好的活性狀態(tài)。
熱原檢測實驗中，標(biāo)準化培養(yǎng)基與恒定環(huán)境讓單核細胞系活性穩(wěn)定，避免PBMC凍存后的功能衰減。上海非動物源熱原檢測體系

上海非動物源熱原檢測體系,熱原檢測

MAT法（單核細胞活化反應(yīng)測定）熱原檢測基于人體免疫反應(yīng)機制設(shè)計，原理是：內(nèi)毒素（革蘭氏陰性菌來源）與非內(nèi)毒素?zé)嵩ǜ锾m氏陽性菌、霉菌、病毒等來源）進入人體后，會活化單核細胞或單核細胞系，使其釋放 IL-6、IL-1、IL-1β、TNF-α 等促炎細胞因子。檢測時將供試品與單核細胞 / 單核細胞系共孵育，再通過 ELISA 定量檢測釋放的 IL-6 含量，結(jié)合內(nèi)毒素標(biāo)準品繪制的標(biāo)曲，即可判斷供試品中熱原含量是否符合規(guī)定，實現(xiàn)內(nèi)毒素與非內(nèi)毒素?zé)嵩娜采w檢測。
江西合規(guī)性熱原檢測憑借深厚的專業(yè)積累，湖州申科生物為行業(yè)提供可靠的熱原檢測解決方案。

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基于單核細胞系的穩(wěn)定性，MAT 熱原檢測可將復(fù)孔數(shù)從藥典要求的≥4 降至≥3。PyroSHENTEK®熱原檢測試劑盒數(shù)據(jù)顯示，單核細胞系標(biāo)曲的 4 復(fù)孔與 3 復(fù)孔，各濃度點（0.0125-1.0EU/mL）的準確度（相對偏差）與精密度均在標(biāo)準范圍內(nèi)，無明顯差異。這一調(diào)整的主要依據(jù)是單核細胞系消除了 PBMC 的異質(zhì)性，無需依賴多復(fù)孔抵消波動，既能滿足熱原檢測的穩(wěn)定性與統(tǒng)計學(xué)合理性要求，又能減少試劑與耗材消耗，降低檢測成本，同時提升實驗效率。因此樣品預(yù)測試時可選擇3復(fù)孔進行初步檢測，產(chǎn)品放行還需按照藥典要求進行4復(fù)孔測試。

熱原是指微量即可引發(fā)恒溫動物體溫異常升高的物質(zhì)，分為內(nèi)源性（如細胞因子）與外源性兩類，外源性熱原又涵蓋微生物來源（革蘭氏陰性菌脂多糖 LPS、革蘭氏陽性菌脂磷壁酸 LTA、病毒、真菌等）與非微生物來源（灰塵、橡膠降解產(chǎn)物等）。傳統(tǒng)細菌內(nèi)毒素檢查法（BET）只能檢測革蘭氏陰性菌的 LPS，無法覆蓋非內(nèi)毒素?zé)嵩鴨魏思毎罨囼灒∕AT）可彌補這一缺陷。其原理是：熱原通過活化單核細胞表面的 Toll 樣受體（TLR，如 TLR4 識別 LPS、TLR2/TLR6 識別 LTA），啟動先天免疫反應(yīng)，促使細胞釋放 IL-6、TNF-α 等促炎細胞因子；隨后采用 ELISA 法檢測 IL-6 濃度，結(jié)合 LPS 標(biāo)準曲線推算樣品中總熱原含量，實現(xiàn)對內(nèi)毒素與非內(nèi)毒素?zé)嵩耐綑z測，契合《中國藥典》9301 指導(dǎo)原則中 全場景防控?zé)嵩L(fēng)險”的要求。
家兔法熱原試驗雖能篩查所有類別熱原，卻因周期長、成本高、靈敏度低而逐步被體外方法取代。

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單核細胞活化反應(yīng)測定（MAT）是近年來熱原檢測領(lǐng)域的突破性技術(shù)，其原理基于人體免疫系統(tǒng)對熱原的天然應(yīng)答機制：人源單核細胞（如 THP-1 細胞系或新鮮人全血單核細胞）在熱原刺激下，會活化胞內(nèi)炎癥信號通路，釋放 IL-6、TNF-α 等促炎細胞因子，通過 ELISA 檢測細胞因子的濃度，即可間接反映樣品中熱原的總量與活性。與傳統(tǒng)檢測方法相比，MAT 法具備三大不可替代的優(yōu)勢：一是廣譜性，可同時檢測細菌內(nèi)毒素、病毒、真菌毒素、支原體等所有類型熱原，填補了鱟試驗法只能檢測內(nèi)毒素的 “非內(nèi)毒素?zé)嵩^(qū)”，尤其適用于疫苗、基因治療產(chǎn)品等易受多種熱原污染的高風(fēng)險產(chǎn)品；二是人源相關(guān)性，采用與人體同源的細胞模型，檢測結(jié)果更貼近臨床實際熱原反應(yīng)，避免家兔試驗中動物種屬差異導(dǎo)致的誤判；三是高靈敏度，對細菌內(nèi)毒素的檢測限可達 0.0125EU/mL，對非內(nèi)毒素?zé)嵩ㄈ缃湍付嗵?、腺病毒）的檢測限低至 ng/pg 級，滿足低限值產(chǎn)品的質(zhì)控需求。
細胞因子IL-6因穩(wěn)定性高、半衰期長，被選為熱原檢測MAT法關(guān)鍵定量指標(biāo)，優(yōu)于TNF-α與IL-1β。湖南熱原檢測技術(shù)升級

MAT熱原檢測通過熱原活化單核細胞釋放促炎細胞因子，再經(jīng)ELISA定量 IL-6判斷供試品是否合格。上海非動物源熱原檢測體系

PyroSHENTEK®熱原檢測試劑盒（貨號 1502100，規(guī)格 96 測試 / 盒）優(yōu)勢在于搭載 MAT 特定單核細胞系，細胞表面表達多種 Toll 樣受體（TLR），可響應(yīng)不同類型熱原。該細胞系來源清晰、可溯源，均一性強且無供體依賴，有效規(guī)避了傳統(tǒng) PBMC 因供體差異導(dǎo)致的結(jié)果波動，同時安全風(fēng)險低，無需擔(dān)憂外源因子污染。試劑盒采用 “標(biāo)準化單核細胞 + ELISA 檢測” 一體化體系，通過嚴格的細胞質(zhì)量控制（如凍存復(fù)融后活率達標(biāo)），確保每次檢測的細胞狀態(tài)一致；搭配預(yù)包被 IL-6 抗體的酶標(biāo)板與配套試劑，進一步減少體系誤差。從標(biāo)曲數(shù)據(jù)來看，其擬合采用 4-Parameter Logistic 模型，R2 達 1.000，EC50 為 0.119EU/mL，參數(shù)置信區(qū)間穩(wěn)定，復(fù)孔結(jié)果重復(fù)性優(yōu)異，能為熱原定量提供準確如一的數(shù)據(jù)支撐，避免因體系不穩(wěn)定導(dǎo)致的檢測偏差。
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