江西細胞療法產品支原體檢測核酸擴增法

來源： 發(fā)布時間：2025-11-12

2023 年美國國立衛(wèi)生研究院（NIH）的對比研究得出一個結論是并非所有商業(yè)化支原體檢測試劑盒都能滿足替代傳統(tǒng)方法的要求，研究對市面上 5 款主流試劑盒（ATCC、梅里埃、賽默飛、羅氏、MB）進行測試，發(fā)現(xiàn)不同試劑盒對不同支原體菌株的檢測靈敏度差異明顯，部分產品無法達到宣稱的≤10 CFU/mL 檢測限（符合歐、日藥典替代培養(yǎng)法的要求）。例如，ATCC 試劑盒對萊氏無膽甾原體、精氨酸支原體的檢測限只為 100 CFU/mL，MB 試劑盒對硬蜱螺原體無法檢出（>1000 CFU/mL）。這一現(xiàn)象表明，試劑盒的檢測性能與支原體菌株特性密切相關，因此企業(yè)需根據(jù)待測樣品的原輔料來源和檢測目的，對試劑盒進行嚴格的性能驗證，避免因檢測限不達標導致質量風險。
一體化支原體檢測卡盒集成全流程，相當于迷你 qPCR 實驗室，普通環(huán)境即可使用。江西細胞療法產品支原體檢測核酸擴增法

江西細胞療法產品支原體檢測核酸擴增法,支原體檢測

細胞和基因治療領域正加速發(fā)展，國內以 CAR-T、間充質干細胞、AAV 基因治療等新型生物制品勢頭正盛。這類產品與傳統(tǒng)制藥差異明顯，給支原體檢測帶來全新挑戰(zhàn)：批產量小但批次多，多數(shù)待檢測樣品含高達 10?個活細胞，且基質復雜如高蛋白、全血、高濃度質粒等。更關鍵的是，新型生物制品終末滅菌難度極大，需從起始材料、原物料到全工藝過程嚴格控污，而支原體污染隱蔽性強、危害大，成為質量安全控制的主要痛點，也推動著檢測方法向更高效、抗干擾的方向升級。
四川復雜基質支原體檢測NAT法支原體檢測 NAT 法驗證報告需包含檢測限、專屬性、耐用性等完整數(shù)據(jù)。

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湖州申科圍繞支原體檢測構建了完整的產品體系，為企業(yè)提供一站式解決方案。主要產品包括 AdvSHENTEK 外源因子全自動核酸檢測分析系統(tǒng)（貨號 1603101）、一體化支原體檢測卡盒（貨號 1509100），以及溯源性強的支原體驗證菌株（口腔支原體 1501501、肺炎支原體 1501503、豬鼻支原體 1501505），驗證菌株均配套 DNA 稀釋液，滿足方法驗證需求。整套方案整合了快速、簡單、準確、合規(guī)四大優(yōu)勢，既解決了傳統(tǒng)檢測周期長、污染風險高、操作復雜的痛點，又能滿足生物藥生產全流程的支原體篩查需求。應用中，可幫助企業(yè)提升產品放行速度、降低質量風險，同時減少人力與場地投入，為細胞療法、疫苗、抗體藥物等生物制品的質量控制提供安全保障。

支原體 NAT 檢測中常見三類問題，其成因多與樣品基質、操作規(guī)范或污染防控相關。1、樣品基質干擾，高濃度 DMSO、人血白蛋白等凍存保護劑，高濃度細胞、DNA 碎片等復雜成分，會抑制檢測反應或干擾信號讀取。2、檢測曲線異常，表現(xiàn)為非特異性擴增圖譜，多因引物設計不當、反應條件優(yōu)化不足或試劑交叉污染導致。3、陰性污染，具體體現(xiàn)為無模板對照（NTC）、陰性對照（NCS）出現(xiàn)翹尾現(xiàn)象，主要源于實驗室分區(qū)不合理、操作流程不規(guī)范（如陰陽性樣本交叉處理）、耗材污染或環(huán)境氣溶膠污染，這些問題均會影響結果判定的準確性，需針對性解決。
疫苗病毒種子批支原體檢測需取全量樣品，建議進行 10mL 種子液提取，確保無漏檢。

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陰性翹尾是支原體 NAT 檢測中常見的異?，F(xiàn)象，表現(xiàn)為 NCS 或 NTC 出現(xiàn)擴增信號，Ct 值多在 35~40 之間，需科學評估并處理。首先考慮污染因素，可能是陰性對照被陽性樣本、試劑或環(huán)境氣溶膠污染，建議立即復測，復測時使用帶濾芯低吸附 TIP 頭，嚴格執(zhí)行陰陽性分區(qū)操作，注重細節(jié)防控。其次需排除背景信號等非典型性擴增的干擾，避免誤判為污染。若前期驗證中頻繁出現(xiàn) NTC 或 NCS 擴增，且已徹底排除污染可能性，可結合已有實驗數(shù)據(jù)重新設置 Cut off 值，確保閾值線能有效區(qū)分真實陽性與背景信號，滿足實驗室檢測需求。
細胞庫（MCB/WCB）需每 2-4 周監(jiān)測支原體，保障生產起始環(huán)節(jié)安全。安徽重組藥物支原體檢測驗證菌株

支原體檢測試劑盒需覆蓋常見污染菌株，避免因菌株遺漏導致漏檢。江西細胞療法產品支原體檢測核酸擴增法

質控結果是支原體 NAT 檢測可靠性的前提，需嚴格遵循判定標準，且需結合實驗室實際條件驗證適配的標準閾值。質控樣品的判定規(guī)則明確：NTC（無模板對照）的 FAM 信號需 2 復孔 Ct≥40 或無明顯擴增曲線，VIC 信號需 2 復孔 Ct<35 且呈有效 “S” 型擴增；NCS（陰性對照）判定標準與 NTC 一致；PC（陽性質控）的 FAM 信號需 2 復孔 Ct<35 且呈有效 “S” 型擴增，PCS（陽性對照底物）判定標準與 PC 一致。只有質控結果全部滿足要求，才能進一步分析樣本結果，若質控不達標，需排查設備、試劑、操作等環(huán)節(jié)的問題并重新檢測。
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