上海非動物源熱原檢測規(guī)范

來源： 發(fā)布時間：2025-11-13

MAT法熱原檢測出現(xiàn) “無信號”，需從試劑、實驗操作、儀器三方面定位原因并解決。試劑層面，抗體不足或失活會導(dǎo)致無法捕獲 IL-6，需核對抗體稀釋比例，檢查保存條件（如 2-8℃）與有效期，必要時更換試劑；底物失效（如變色、沉淀）會無法顯色，需觀察底物外觀，失效則更換；混合不同試劑盒試劑會因成分不匹配導(dǎo)致反應(yīng)失敗，需使用同試劑盒試劑；ELISA 試劑盒保存不當(dāng)（如反復(fù)凍融）會破壞試劑活性，需按說明書分條件保存（如抗體 2-8℃、底物避光）。實驗操作中，孵育溫度過低（<37℃）會抑制酶促反應(yīng)，需提前將試劑與孔板平衡至室溫，確保孵育溫度達(dá)標(biāo)；洗板機壓力過高或手動洗滌過猛，會洗去結(jié)合的抗體與酶，需調(diào)整洗板機壓力或輕柔手動洗滌；孵育時孔板未密封導(dǎo)致孔變干，會使反應(yīng)體系破壞，需用封口膜密封孔板。儀器方面，洗板機噴頭堵塞會導(dǎo)致洗滌不均或未洗，需清理噴頭；酶標(biāo)儀波長設(shè)置錯誤（未選 450nm）會無法檢測信號，需確認(rèn)波長設(shè)置正確。
湖州申科熱原檢測試劑盒（MAT）的單核細(xì)胞系無供體依賴性，解決PBMC因免疫狀態(tài)差異的結(jié)果波動。上海非動物源熱原檢測規(guī)范

上海非動物源熱原檢測規(guī)范,熱原檢測

家兔熱原試驗作為熱原檢測領(lǐng)域的 “法定傳統(tǒng)方法”，被中國藥典（ChP）、美國藥典（USP）、歐洲藥典（EP）均列為法定檢測項目，其主要優(yōu)勢在于可通過家兔體溫應(yīng)答篩查所有類型熱原，尤其適用于無法排除非內(nèi)毒素?zé)嵩廴镜母唢L(fēng)險產(chǎn)品，如血液制品、放射性質(zhì)藥物及部分生物制劑。然而，家兔熱原試驗存在明顯局限：動物個體差異大，需額外投入時間與成本篩選合格家兔；檢測周期長（至少 6 小時），無法滿足生物制品快速放行需求；靈敏度較低（對 LPS 檢測限≥5EU/kg），與全球倡導(dǎo)的“動物福利3R原則”背道而馳。
原料藥熱原檢測風(fēng)險評估湖州申科 MAT法熱原檢測試劑盒細(xì)胞復(fù)融后可直接使用，無需離心復(fù)蘇，24 小時內(nèi)出檢測結(jié)果。

上海非動物源熱原檢測規(guī)范,熱原檢測

熱原是能引發(fā)恒溫動物體溫異常升高的物質(zhì)總稱，主要成分為細(xì)菌內(nèi)毒素（革蘭氏陰性菌脂多糖 LPS），同時涵蓋病毒、真菌毒素、支原體等非內(nèi)毒素?zé)嵩?，其檢測是保障藥品與醫(yī)療器械安全性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。當(dāng)前熱原檢測已形成 “特異性檢測 + 廣譜篩查” 互補的完整體系：以鱟試驗法（含天然 LAL 與重組 rCR/rFC 試劑）作為細(xì)菌內(nèi)毒素的特異性檢測手段，憑借 fg 級靈敏度成為制藥行業(yè)常規(guī)質(zhì)控方法，可通過凝膠法實現(xiàn)定性、動態(tài)濁度 / 顯色法完成定量；以家兔熱原試驗作為傳統(tǒng)廣譜篩查方法，雖操作繁瑣（需預(yù)試篩選基礎(chǔ)體溫穩(wěn)定家兔，正式試驗觀察 3 小時體溫變化），但仍是放射性質(zhì)的藥物、血液制品等高風(fēng)險產(chǎn)品排除非內(nèi)毒素?zé)嵩难a充手段；以單核細(xì)胞活化反應(yīng)測定（MAT）作為新興全熱原檢測技術(shù)，利用人源單核細(xì)胞（如 THP-1 細(xì)胞）釋放 IL-6、TNF-α 等細(xì)胞因子的特性，可同時識別內(nèi)毒素與非內(nèi)毒素?zé)嵩?，契合疫苗、基因治療產(chǎn)品等對風(fēng)險控制的需求。三種方法協(xié)同應(yīng)用，從原料入廠到成品放行構(gòu)建全流程熱原防控網(wǎng)絡(luò)，既保證對內(nèi)毒素的準(zhǔn)確監(jiān)控，又避免非內(nèi)毒素?zé)嵩倪z漏風(fēng)險。

PyroSHENTEK®熱原檢測試劑盒（貨號 1502100，規(guī)格 96 測試 / 盒）優(yōu)勢在于搭載 MAT 特定單核細(xì)胞系，細(xì)胞表面表達(dá)多種 Toll 樣受體（TLR），可響應(yīng)不同類型熱原。該細(xì)胞系來源清晰、可溯源，均一性強且無供體依賴，有效規(guī)避了傳統(tǒng) PBMC 因供體差異導(dǎo)致的結(jié)果波動，同時安全風(fēng)險低，無需擔(dān)憂外源因子污染。試劑盒采用 “標(biāo)準(zhǔn)化單核細(xì)胞 + ELISA 檢測” 一體化體系，通過嚴(yán)格的細(xì)胞質(zhì)量控制（如凍存復(fù)融后活率達(dá)標(biāo)），確保每次檢測的細(xì)胞狀態(tài)一致；搭配預(yù)包被 IL-6 抗體的酶標(biāo)板與配套試劑，進一步減少體系誤差。從標(biāo)曲數(shù)據(jù)來看，其擬合采用 4-Parameter Logistic 模型，R2 達(dá) 1.000，EC50 為 0.119EU/mL，參數(shù)置信區(qū)間穩(wěn)定，復(fù)孔結(jié)果重復(fù)性優(yōu)異，能為熱原定量提供準(zhǔn)確如一的數(shù)據(jù)支撐，避免因體系不穩(wěn)定導(dǎo)致的檢測偏差。
研究建立體外熱原檢測替代方法以替代家兔法，符合3R理論，是熱原檢測國際趨勢，受各國藥監(jiān)機構(gòu)重視。

上海非動物源熱原檢測規(guī)范,熱原檢測

湖州申科生物熱原檢測（MAT法） 試劑盒在靈敏度、穩(wěn)定性與適用性上表現(xiàn)突出，關(guān)鍵性能參數(shù)符合藥典要求：標(biāo)曲線性范圍 0.0125-1.0EU/mL，相關(guān)系數(shù) R2≥0.98，定量限 0.025EU/mL，檢測限（LOD）0.0125EU/mL，批間精密度 CV≤25%，可準(zhǔn)確捕捉微量熱原。其優(yōu)勢在于特定的單核細(xì)胞系 —— 與依賴供體血液的 PBMC 細(xì)胞不同，申科 MAT 細(xì)胞系來源清晰可溯源，無需倫理審批與血站合作，規(guī)避供體差異導(dǎo)致的檢測波動。對比同類型產(chǎn)品（如國外廠家 PBMC 細(xì)胞），申科細(xì)胞系的標(biāo)曲各濃度點 CV 更低（ 低至3.6%）、相對偏差更小（ 12.31%），線性 R2 達(dá) 1.000，穩(wěn)定性更優(yōu)。此外，細(xì)胞凍存液組分經(jīng)優(yōu)化，復(fù)蘇后活率高，無需額外調(diào)整細(xì)胞狀態(tài)即可直接與供試品共孵育，操作便捷；且適配任何具備 450nm 波長的酶標(biāo)儀，無需專門的設(shè)備，降低實驗室投入成本。
憑借深厚的專業(yè)積累，湖州申科生物為行業(yè)提供可靠的熱原檢測解決方案。上海非動物源熱原檢測規(guī)范

單核細(xì)胞活化反應(yīng)試驗（MAT）利用人源細(xì)胞釋放IL-6等因子，可同時檢出病毒、真菌等非內(nèi)毒素?zé)嵩?。上海非動物源熱原檢測規(guī)范

在 MAT 法熱原檢測中，PBMC（外周血單核細(xì)胞）與單核細(xì)胞系各有優(yōu)劣，單核細(xì)胞系更適合標(biāo)準(zhǔn)化檢測。PBMC 的優(yōu)勢在于免疫細(xì)胞成分豐富（含單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等），對熱原反應(yīng)敏感，靈敏度相對較高；但局限同樣明顯 ——PBMC 需從不同供體獲取，供體免疫狀態(tài)差異會導(dǎo)致檢測結(jié)果不穩(wěn)定，且無法長期保存，難以建立標(biāo)準(zhǔn)化方法學(xué)。單核細(xì)胞系（如 HL-60、MM6、THP1）則克服了 PBMC 的局限：細(xì)胞來源穩(wěn)定（可批量培養(yǎng)），TLR 受體表達(dá)覆蓋主要亞型（如 HL-60 表達(dá) TLR1-TLR9），對熱原反應(yīng)重復(fù)性好，更適合商業(yè)化試劑盒與法規(guī)檢測。不同單核細(xì)胞系性能也有差異：MM6/IL-6 法檢測限約 0.05EU/mL，THP1/TNF-α 法因 TNF-α 為一級免疫效應(yīng)物檢測限更低，但 TNF-α 穩(wěn)定性差；HL-60/IL-6 法檢測限與穩(wěn)定性均優(yōu)于前兩者，成為主流選擇。湖州申科生物MAT試劑盒選用 HL-60 細(xì)胞系，正是基于其優(yōu)異的穩(wěn)定性與熱原響應(yīng)適配多場景，確保不同批次檢測結(jié)果一致。
上海非動物源熱原檢測規(guī)范