江西疫苗產(chǎn)品支原體檢測指示細胞培養(yǎng)法

來源： 發(fā)布時間：2025-11-14

針對新型生物制品中 10?細胞基質(zhì)、全血、1mg/mL 高濃度質(zhì)粒、5% 人白等特殊復雜樣品基質(zhì)，MycoSHENTEK® 支原體 qPCR 檢測試劑盒（2G）進行了方法性能驗證，展現(xiàn)出極強的樣品適用性。實驗數(shù)據(jù)顯示，在 CHO-S&Vero 細胞（10?個）、5% 人血白蛋白、全血等基質(zhì)中，該試劑盒對 10 CFU/mL 或 100 CFU/mL 的支原體均能穩(wěn)定檢出，擴增曲線清晰可靠。其優(yōu)化的前處理流程與檢測體系有效規(guī)避了復雜基質(zhì)的干擾，無需額外傳代步驟，徹底解決了傳統(tǒng)方法在復雜樣品檢測中易受抑制、結(jié)果不準的問題，覆蓋病毒、培養(yǎng)液、成品等多種樣品類型。
耐用性驗證需確認方法參數(shù)微小變動時，支原體檢測結(jié)果不受影響。江西疫苗產(chǎn)品支原體檢測指示細胞培養(yǎng)法

江西疫苗產(chǎn)品支原體檢測指示細胞培養(yǎng)法,支原體檢測

培養(yǎng)基的科學選擇與合規(guī)使用是支原體培養(yǎng)法檢測成功的基礎，湖州申科按 USP 標準明確了三類推薦培養(yǎng)基的適用場景。Hayflick Media 用于支原體一般性檢測，F(xiàn)rey Media 專門針對滑液囊支原體檢測，F(xiàn)riis Media 則適用于非禽類支原體檢測。為確保少量支原體（約 100cfu 或 100ccu）不被遺漏，需使用足夠數(shù)量的固體與液體培養(yǎng)基開展檢測；若選用其他替代培養(yǎng)基，必須嚴格符合 USP 標準要求。此外，每批培養(yǎng)基均需進行針對性的微生物檢測（即營養(yǎng)特性測試），通過標準化的質(zhì)量把控，避免因培養(yǎng)基性能缺陷導致檢測失效，為后續(xù)檢測流程提供穩(wěn)定可靠的基礎條件。
北京重組藥物支原體檢測核酸擴增法歐洲藥典2.6.7 要求測定支原體 GC/CFU 時，需同時考量上清與細胞組分，避免數(shù)據(jù)偏差。

江西疫苗產(chǎn)品支原體檢測指示細胞培養(yǎng)法,支原體檢測

MycoSHENTEK® 支原體 DNA 檢測試劑盒參照 EP 2.6.7 和 JP XVII 支原體檢測相關要求完成全面性能驗證，是經(jīng)過三方室間驗證、性能完全符合藥典標準的支原體檢測試劑盒。該試劑盒檢測靈敏度高達 10CFU/mL，可同時替代傳統(tǒng)培養(yǎng)法與指示細胞培養(yǎng)法，大幅縮短檢測周期。經(jīng)實驗驗證，其對雞滑液支原體、豬鼻支原體、萊氏無膽甾支原體等多種常見污染菌株的檢出率均達到 100%（24/24），即使對口腔支原體等低濃度菌株，檢出率也滿足 95% 以上。憑借覆蓋范圍廣、靈敏度高、性能穩(wěn)定、合規(guī)性強的關鍵優(yōu)勢，該試劑盒為生物制品企業(yè)提供了高效、可靠的支原體檢測工具，助力企業(yè)滿足全球監(jiān)管要求并保障產(chǎn)品質(zhì)量。

支原體檢測培養(yǎng)法是生物制劑質(zhì)量控制的關鍵環(huán)節(jié)，湖州申科提供的 USP 支原體培養(yǎng)法檢測服務，嚴格遵循USP<63 mycoplasma tests（culture method）>標準，為生物制劑開發(fā)與生產(chǎn)提供可靠保障。該方法適用于檢測組織或細胞培養(yǎng)物、消化肉液及其他疑似支原體污染的材料，是確保生物技術產(chǎn)品及生產(chǎn)用材料合規(guī)性的必要要求。檢測周期約 29 天，流程需滿足雙重要求：每批次培養(yǎng)基必須進行營養(yǎng)特性測試，確保檢測效能；供試品需完成抑制物質(zhì)檢測，若生產(chǎn)方法發(fā)生變化可能影響檢測結(jié)果，需重復該測試，避免抑制成分干擾支原體檢出，保障檢測結(jié)果的準確性與可靠性。
支原體檢測試劑盒需覆蓋常見污染菌株，避免因菌株遺漏導致漏檢。

江西疫苗產(chǎn)品支原體檢測指示細胞培養(yǎng)法,支原體檢測

針對不同類型的樣品基質(zhì)，需采用定制化的支原體檢測前處理方案，以消除干擾、提升檢測效果。細胞懸液需經(jīng)熱處理、樣品處理液作用、細胞碎片去除、濃縮離心，再 55℃消化；上清或高濃度質(zhì)粒樣品需先濃縮離心，再用樣品處理液作用后 55℃消化；5% 人血白蛋白樣品則采用濃縮離心 + 樣品處理液作用 + 25℃消化的流程。常見干擾基質(zhì)包括凍存保護劑、高濃度細胞、代謝產(chǎn)物等，優(yōu)化前處理可遵循三大原則：提取前通過離心取上清或去除抑制劑預處理樣品；高濃度蛋白樣本提取時增加蛋白酶 K 用量，增強蛋白降解效果；細胞類樣品適當降低細胞數(shù)或先裂解細胞，減少細胞基質(zhì)對檢測的干擾。
EP 新規(guī)明確支原體驗證菌株 GC/CFU 比值＜10，需在指數(shù)階段收獲以保障活性與分散性。河南干細胞產(chǎn)品支原體檢測試劑盒

支原體檢測 NAT 法引物設計需平衡覆蓋范圍與特異性，避免交叉反應。江西疫苗產(chǎn)品支原體檢測指示細胞培養(yǎng)法

支原體是一類無細胞壁的原核微生物，直徑只有 0.1-0.8 μm，常規(guī) 0.22 μm 細菌過濾器無法有效去除，其污染在細胞培養(yǎng)領域極為普遍。這類微生物會嚴重干擾培養(yǎng)細胞的表型特征與正常生長，給生物制品質(zhì)量安全帶來極大隱患，且與細菌、真菌污染不同，支原體污染通常不會導致培養(yǎng)液渾濁或細胞可見病變，需通過專業(yè)方法檢測?；诖?，F(xiàn)DA、WHO 等全球監(jiān)管機構及 USP、EP、ChP 等主流藥典均明確要求，對測試細胞庫（主細胞庫、工作細胞庫）、下游細胞培養(yǎng)物、終產(chǎn)品及對照細胞等關鍵環(huán)節(jié)開展支原體污染篩查，確保生物制品生產(chǎn)全流程安全可控。
江西疫苗產(chǎn)品支原體檢測指示細胞培養(yǎng)法