安徽生物制品支原體檢測NAT法

來源： 發(fā)布時間：2025-11-17

檢測限驗證是支原體 NAT 方法（核酸擴增法）合規(guī)性的關(guān)鍵要求，法規(guī)明確界定需為每種目標支原體確定陽性檢測臨界值。驗證流程需滿足嚴格的實驗設(shè)計：每種支原體至少進行三次單獨的 10 倍梯度稀釋，每次稀釋后需制備平行管檢測，再確保各稀釋濃度獲得 24 個檢測結(jié)果。陽性臨界值的判定標準為，該濃度下至少 95% 的試驗運行能得到陽性結(jié)果，即 24 個樣品中需至少出現(xiàn) 23 個有效陽性結(jié)果。這一嚴謹設(shè)計旨在確保 NAT 檢測方法在實際應(yīng)用中，能夠穩(wěn)定檢出低濃度支原體污染，避免因檢測靈敏度不足導(dǎo)致的安全風(fēng)險，為生物制品質(zhì)量控制提供可靠保障。
EP 新規(guī)明確支原體驗證菌株 GC/CFU 比值＜10，需在指數(shù)階段收獲以保障活性與分散性。安徽生物制品支原體檢測NAT法

安徽生物制品支原體檢測NAT法,支原體檢測

湖州申科構(gòu)建了覆蓋全領(lǐng)域、全場景的支原體檢測一站式合規(guī)解決方案。產(chǎn)品矩陣豐富，包括支原體 DNA 提取純化試劑盒（2G）、檢測試劑盒（2G，PCR - 熒光探針法）、DNA 校準品、一體化檢測卡盒、外源因子全自動核酸分析系統(tǒng)，以及 10 余種支原體驗證菌株（已上市豬鼻、肺炎、口腔支原體等，即將上市發(fā)酵、精氨酸支原體等）。方案具備極強的場景適配性，可應(yīng)對 5% 人白、高濃度細胞等復(fù)雜基質(zhì)樣品，支持從起始材料到終產(chǎn)品的全流程檢測，滿足細胞療法、抗體、疫苗、CRO/CDMO 等不同領(lǐng)域的檢測需求。服務(wù)層面，提供從方法學(xué)建立、樣品檢測、適用性驗證、傳統(tǒng)法與 qPCR 法比對到特殊菌株定制的全流程技術(shù)支持，配合企業(yè)完成監(jiān)管機構(gòu)現(xiàn)場審計，滿足企業(yè)從 IND 到 BLA/NDA 的申報需求，實現(xiàn) “極簡操作、一步加樣、避免污染、全量檢測” 的價值。
重慶疫苗產(chǎn)品支原體檢測技術(shù)服務(wù)支原體污染會改變細胞生理特性，導(dǎo)致生長緩慢、基因表達異常，需嚴格防控。

安徽生物制品支原體檢測NAT法,支原體檢測

質(zhì)控結(jié)果是支原體 NAT 檢測可靠性的前提，需嚴格遵循判定標準，且需結(jié)合實驗室實際條件驗證適配的標準閾值。質(zhì)控樣品的判定規(guī)則明確：NTC（無模板對照）的 FAM 信號需 2 復(fù)孔 Ct≥40 或無明顯擴增曲線，VIC 信號需 2 復(fù)孔 Ct<35 且呈有效 “S” 型擴增；NCS（陰性對照）判定標準與 NTC 一致；PC（陽性質(zhì)控）的 FAM 信號需 2 復(fù)孔 Ct<35 且呈有效 “S” 型擴增，PCS（陽性對照底物）判定標準與 PC 一致。只有質(zhì)控結(jié)果全部滿足要求，才能進一步分析樣本結(jié)果，若質(zhì)控不達標，需排查設(shè)備、試劑、操作等環(huán)節(jié)的問題并重新檢測。

此前，支原體檢測依賴培養(yǎng)法和指示細胞培養(yǎng)法，這兩種傳統(tǒng)方法均被各國藥典列為基礎(chǔ)檢測手段，但存在明顯短板。培養(yǎng)法作為 “金標準”，需陽性活菌參照，每批次培養(yǎng)基需做靈敏度測試，完整合規(guī)檢測周期長達 21-35 天；指示細胞培養(yǎng)法同樣耗時 14-28 天，難以滿足新型生物制品快速上市、短貨架期的放行需求。更棘手的是，面對高蛋白等復(fù)雜樣品基質(zhì)，傳統(tǒng)方法易受干擾或抑制，需額外增加傳代培養(yǎng)步驟，導(dǎo)致檢測時間再延長 2-3 周，嚴重影響生產(chǎn)效率，也難以適配新型生物制品的檢測場景。
USP<77> 草案新增支原體 NAT 法方法學(xué)驗證章節(jié)，明確檢測限需≥24 次數(shù)據(jù)支撐統(tǒng)計分析。

安徽生物制品支原體檢測NAT法,支原體檢測

支原體 NAT 檢測的特異性驗證面臨主要挑戰(zhàn)：需設(shè)計覆蓋多種支原體的 PCR 引物，而覆蓋范圍越廣，越可能因支原體與革蘭氏陽性菌的系統(tǒng)進化相關(guān)性，出現(xiàn)交叉檢測現(xiàn)象，影響結(jié)果準確性。因此，特異性驗證需重點排查非目標微生物的干擾，確保檢測結(jié)果的專一性。穩(wěn)健性驗證同樣關(guān)鍵，需證實檢測方法在人為引入的微小參數(shù)變化（如反應(yīng)溫度、試劑濃度波動等）下，仍能保持結(jié)果穩(wěn)定，避免因?qū)嶒灄l件差異導(dǎo)致的檢測偏差。這兩項驗證直接決定了 NAT 方法在不同實驗室、不同操作場景下的適用性，是其獲得法規(guī)認可的重要前提。
支原體檢測試劑盒批間穩(wěn)定性至關(guān)重要，需通過多批次驗證確保質(zhì)量均一。湖南重組藥物支原體檢測可比性驗證

歐洲藥典（EP）2.6.7 認可 NAT 法作為支原體檢測替代方法，需通過檢測限與可比性驗證。安徽生物制品支原體檢測NAT法

湖州申科的支原體檢測方案已在多個領(lǐng)域積累了豐富的客戶申報案例，覆蓋細胞療法、抗體藥物、疫苗、CRO/CDMO 等細分賽道。在細胞療法領(lǐng)域，方案成功應(yīng)用于已上市藥物的方法變更，替換進口試劑盒并通過中檢院復(fù)核，驗證結(jié)果獲得 CDE 認可用于產(chǎn)品放行檢測在抗體藥物領(lǐng)域，支持多家企業(yè)完成 BLA 申報；在疫苗與 CRO/CDMO 領(lǐng)域，為諸多頭部企業(yè)提供 IND 申報支持。方案的應(yīng)用場景涵蓋從 IND 到 BLA/NDA 的全申報周期，適配自動化提取 + 檢測試劑盒 + 菌株 + qPCR 儀、外源因子一體機等多種配置，滿足不同企業(yè)的個性化檢測需求，獲得市場認可。
安徽生物制品支原體檢測NAT法