北京ELISA法宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法開發(fā)

來源： 發(fā)布時間：2025-11-20

湖州申科生物搭建起專業(yè)化宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測平臺，采用 ELISA 技術(shù)對宿主細胞蛋白總量展開分析，嚴格控制 CV 偏差與回收率指標，確保實驗結(jié)果的真實性，其研發(fā)的試劑盒及抗體具備高靈敏度、強特異性等優(yōu)勢。該平臺在技術(shù)服務層面提供兩類關(guān)鍵支撐：一是針對 CHO、大腸桿菌（E.coli）、酵母等多種宿主的 HCP 殘留檢測服務，可直接輸出蛋白殘留量與樣品回收率數(shù)據(jù)；二是配套的樣品適用性驗證體系，借助基質(zhì)定量下限驗證、樣品稀釋度驗證、準確性驗證及精密度驗證（包含重復性與中間精密度）等多維度檢測方案，搭配完整的試劑盒性能報告，保障檢測結(jié)果的準確性與可溯源性，為生物制品工藝雜質(zhì)控制提供可靠支持
不同技術(shù)平臺獲得的抗體覆蓋率水平不一樣，一般覆蓋率水平從高到低依次IMBS-MS>IMBS-2D>2D-Western Blot。北京ELISA法宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法開發(fā)

北京ELISA法宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法開發(fā),宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

依據(jù)美國藥典 1132 章節(jié)規(guī)定，HCPs 校準品需具備代表性，能夠覆蓋實際產(chǎn)品生產(chǎn)工藝中的 HCPs。結(jié)合 HCP 免疫檢測方法的使用目的與預期風險管理需求，為滿足工藝開發(fā)、驗證需求，同時應對下游工藝可能出現(xiàn)的異常失效或工藝變更情況，建議選用上游發(fā)酵工藝末端（如澄清處理后的工藝點）的樣本作為 HCPs 來源。實際制備時，可采用空細胞或空載細胞，在模擬實際工藝的預設條件下采集樣本，再通過二維電泳、高分辨率質(zhì)譜等蛋白質(zhì)組學技術(shù)，對模擬工藝與實際工藝下 HCPs 的代表性開展表征分析。越靠近下游工藝，HCPs 的蛋白種類越少，雖更接近成品（DS）中的 HCPs，但這類樣本可能無法滿足工藝開發(fā)與驗證需求，也難以覆蓋工藝潛在風險，因此通常不推薦使用，或只作為上游工藝 HCPs 免疫檢測方法的輔助材料。
北京ELISA法宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法開發(fā)湖州申科構(gòu)建 HCP ELISA 檢測全流程平臺，確保試劑盒性能可靠。

北京ELISA法宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法開發(fā),宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

湖州申科生物依托先進的整合技術(shù)平臺，在 HCP 檢測領(lǐng)域構(gòu)筑優(yōu)勢。公司自主研發(fā)出突破性技術(shù)，包括基于 IMBS 的抗體覆蓋率檢測方法與基于核酸文庫的低豐度 HCP 富集技術(shù)，有效提升 HCP 檢測靈敏度與抗體覆蓋能力，相關(guān)成果已在《中國新藥雜志》《藥物分析雜志》等期刊發(fā)表，且被納入國家科技重大專項。同時，借助前沿的精密分析平臺，湖州申科打造了覆蓋完整 HCP 分析鏈條的 LC-MS 解決方案，涵蓋抗原一致性評價、IMBS 前處理、低豐度蛋白富集、生信分析及專屬數(shù)據(jù)庫構(gòu)建等關(guān)鍵環(huán)節(jié)，構(gòu)建起從樣品管理到風險分析的閉環(huán)體系。該平臺嚴格遵循法規(guī)要求，所有檢測技術(shù)均通過符合 ICH 及藥典標準的方法學驗證，確保檢測數(shù)據(jù)可靠，且滿足生物制品申報（如 IND/BLA）的法規(guī)要求。憑借這一技術(shù)整合能力，公司已為國內(nèi)外上百家生物醫(yī)藥企業(yè)提供從工藝開發(fā)到質(zhì)控放行的一站式 HCP 檢測服務，助力單抗、疫苗等產(chǎn)品提升安全性與合規(guī)性。

美國藥典 <1132> 與歐洲藥典 < 2.6.34 > 建議，對即將進入商業(yè)化生產(chǎn)（臨床 III 期及后續(xù)階段）或生產(chǎn)工藝已穩(wěn)定的生物制品，采用定制化 ELISA 試劑盒開展宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測，背后原因主要包括四點：①確保檢測方法能充分覆蓋實際工藝產(chǎn)生的 HCPs，防止漏檢關(guān)鍵雜質(zhì)；②為更準確的免疫原性與安全性評估提供支持；③提供真實的工藝表征數(shù)據(jù)，而非推測性數(shù)據(jù)；④滿足商業(yè)化生產(chǎn)質(zhì)量控制對方法一致性的要求。此外，研究人員對當前市場常見的 HCP ELISA 商業(yè)化試劑盒進行測試，并將其與 HCP ELISA 定制化試劑盒對比。實驗結(jié)果顯示，不同商業(yè)化試劑盒檢測同一樣品的數(shù)值差異明顯，且準確性均低于定制化試劑盒 —— 這一結(jié)果表明，定制化試劑盒更能滿足產(chǎn)品質(zhì)量控制的實際需求。
為確保HCP ELISA檢測產(chǎn)品符合申報要求，湖州申科在試劑盒的全流程開發(fā)方案嚴格按照法規(guī)要求。

北京ELISA法宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法開發(fā),宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

在宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測的分析方法里，ELISA法應用較多，也是QC日常放行檢測的主要方式。該方法操作相對簡便、檢測精度較好，便于設定控制范圍與制定技術(shù)規(guī)范，適用于產(chǎn)品開發(fā)及過程控制；不過，ELISA檢測依賴抗原與抗體的特異性結(jié)合，因此以生物制品中HCP為免疫原制備的抗體質(zhì)量，對檢測結(jié)果影響極大。無論是市售ELISA試劑盒，還是實驗室自制的多克隆抗體，若抗體的特異性與適用性不足，都可能導致HCP漏檢，進而給生物制品質(zhì)量安全埋下隱患。另外，ELISA檢測HCP時采用多克隆抗體，無法針對性反映高風險HCP殘留蛋白的實際存在狀況。
總蛋白檢測差異是 HCP 免疫檢測結(jié)果不同的原因之一。上海MRC-5宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測常見問題分析

針對 HCP 檢測經(jīng)典 ELISA 法的漏檢風險，需對試劑盒抗體進行覆蓋率評估。北京ELISA法宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法開發(fā)

中國倉鼠卵巢細胞（Chinese Hamster Ovary，CHO）是生物制品生產(chǎn)中常用的動物細胞表達系統(tǒng)，廣泛應用于抗體、重組蛋白、疫苗等產(chǎn)品的制備。采用 CHO 細胞作為宿主進行生產(chǎn)時，難免會引入宿主細胞蛋白（HCP）雜質(zhì)；即便 HCP 殘留量較低，仍可能存在免疫原性，還會帶來降低產(chǎn)品蛋白穩(wěn)定性等風險。因此，需對生物制品中的 HCP 殘留進行定量分析，從而保障純化工藝的一致性與終產(chǎn)品的安全性。SHENTEK®CHO 宿主細胞蛋白（HCP ）殘留檢測試劑盒實現(xiàn)了關(guān)鍵試劑的全國產(chǎn)化，其通過 CHO 細胞（K1&S）補料分批培養(yǎng)工藝制備 HCPs，再以此免疫綿羊獲取抗體，適用于檢測 CHO 細胞系表達的生物制品（如單抗、重組蛋白、疫苗等）中的 HCP 殘留。該試劑盒具有操作步驟少、檢測速度快、專一性強、性能穩(wěn)定可靠的特點。
北京ELISA法宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法開發(fā)