廣東生物制品內(nèi)毒素檢測(cè)法規(guī)要求

來(lái)源： 發(fā)布時(shí)間：2025-11-24

檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素的堂試劑方法，是一個(gè)生物反應(yīng)過(guò)程，受到很多因素的干擾。在一個(gè)供試品的檢測(cè)方法固定下來(lái)之前，為了得到準(zhǔn)確的結(jié)果，必須要了解供試品與鱟試劑之間的相互關(guān)系。供試品中的成分往往非常復(fù)雜，而且會(huì)干擾試驗(yàn)檢測(cè)系統(tǒng)的功能。很多干擾的機(jī)理，并不是非常清楚。但是業(yè)界比較能夠接受的理論是，如果供試品中某些因子影響了鱟試劑中蛋白的表達(dá)功能，則被認(rèn)為是干擾作用（Inhibition/Enhancement，V/E）。干擾作用產(chǎn)生的因素較多，一般包括試劑因素（鱟試劑、內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品）供試品因素（pH值、溫度、離子強(qiáng)度、濃度、水溶性、黏度、可發(fā)生鱟試劑反應(yīng)的非內(nèi)毒素雜質(zhì)）和實(shí)驗(yàn)因素（試驗(yàn)器皿、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水、鱟試劑抗干擾能力）等。
內(nèi)毒素易形成聚集體，若未充分分散，會(huì)使樣品中內(nèi)毒素含量被低估，影響檢測(cè)。廣東生物制品內(nèi)毒素檢測(cè)法規(guī)要求

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內(nèi)毒素檢測(cè)重組級(jí)聯(lián)試劑（rCR）在方法橋接方面具有明顯優(yōu)勢(shì)，可大幅度降低實(shí)驗(yàn)室的轉(zhuǎn)換成本。在設(shè)備兼容性上，rCR 無(wú)需額外采購(gòu)新設(shè)備，完全適配天然鱟動(dòng)態(tài)顯色法現(xiàn)用的酶標(biāo)儀（如 Molecular Devices、Tecan sunrise、Thermo MultiSkan ET 等品牌），支持 405nm 波長(zhǎng)動(dòng)態(tài)讀數(shù)和 37℃恒溫孵育。操作流程上，rCR 的樣品處理、試劑混合、加樣孵育等步驟與天然鱟試劑一致，實(shí)驗(yàn)室無(wú)需重新培訓(xùn)操作人員或修改 SOP。顯色系統(tǒng)方面，rCR 沿用與天然試劑相同的 PNA 顯色底物，通過(guò)黃色信號(hào)變化定量，檢測(cè)原理和數(shù)據(jù)分析方法保持不變。這種高度兼容性使實(shí)驗(yàn)室能快速完成方法驗(yàn)證和切換，加速重組試劑的合規(guī)應(yīng)用進(jìn)程。
上海高效內(nèi)毒素檢測(cè)技術(shù)服務(wù)內(nèi)毒素干擾試驗(yàn)回收率需在 50%-200%，驗(yàn)證樣品基質(zhì)不影響內(nèi)毒素檢出。

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重組級(jí)聯(lián)試劑（rCR）通過(guò)完整模擬天然鱟試劑的酶促級(jí)聯(lián)反應(yīng)路徑，實(shí)現(xiàn)高效且特異的內(nèi)毒素檢測(cè)。其反應(yīng)機(jī)制為：內(nèi)毒素首先活化重組 C 因子，活化的 C 因子進(jìn)一步活化重組 B 因子，隨后活化重組凝固酶原轉(zhuǎn)化為凝固酶，再催化顯色底物產(chǎn)生黃色信號(hào)（405nm 波長(zhǎng)可檢測(cè)）。這一級(jí)聯(lián)放大過(guò)程有效提升了檢測(cè)靈敏度，即使微量?jī)?nèi)毒素也能產(chǎn)生可識(shí)別信號(hào)。與單因子的重組 C 因子法（rFC）相比，rCR 的多因子級(jí)聯(lián)反應(yīng)抗干擾能力更強(qiáng)，尤其對(duì)復(fù)雜基質(zhì)樣品（如高蛋白單抗、疫苗）表現(xiàn)更優(yōu)。同時(shí)，rCR 剔除了天然鱟試劑中的 G 因子，避免了與 β-D 葡聚糖的非特異性反應(yīng)，從根本上減少假陽(yáng)性結(jié)果，保障檢測(cè)數(shù)據(jù)的可靠性。

隨著生物制藥行業(yè)的快速發(fā)展，注射用藥劑、疫苗等制劑及植入性醫(yī)療器械的生產(chǎn)需求激增，直接推動(dòng)了內(nèi)毒素檢測(cè)試劑的市場(chǎng)需求。然而，傳統(tǒng)內(nèi)毒素檢測(cè)嚴(yán)重依賴(lài)天然鱟試劑，而全球鱟資源正面臨衰減危機(jī)。2021 年 2 月，我國(guó)國(guó)家林業(yè)和草原局、農(nóng)業(yè)農(nóng)村部聯(lián)合公告將鱟科動(dòng)物列為國(guó)家二級(jí)保護(hù)動(dòng)物，嚴(yán)格限制捕撈配額，導(dǎo)致天然鱟試劑價(jià)格持續(xù)上漲，甚至出現(xiàn)關(guān)鍵檢測(cè)環(huán)節(jié)的供應(yīng)短缺問(wèn)題。在此背景下，湖州申科研發(fā)的重組級(jí)聯(lián)試劑（rCR）通過(guò)基因工程技術(shù)實(shí)現(xiàn)無(wú)動(dòng)物源性生產(chǎn)，徹底擺脫對(duì)鱟血資源的依賴(lài)。該試劑支持 “減少、替代、優(yōu)化” 的 3R 動(dòng)物保護(hù)原則，不僅解決了資源受限的行業(yè)痛點(diǎn)，還能保障長(zhǎng)期穩(wěn)定供應(yīng)，為內(nèi)毒素檢測(cè)領(lǐng)域的可持續(xù)發(fā)展提供了理想解決方案。
凝膠法鱟試劑通過(guò)觀察凝膠形成定性?xún)?nèi)毒素，操作簡(jiǎn)便，適合醫(yī)療器械內(nèi)毒素檢測(cè)初篩。

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醫(yī)療器械（如輸液器、注射器、植入式設(shè)備）若攜帶內(nèi)毒素，可能通過(guò)血液、組織接觸引發(fā)異常反應(yīng)或炎癥反應(yīng)。其檢測(cè)需遵循 “模擬臨床使用” 原則：采用浸提液（如 0.9% 氯化鈉溶液或注射用水）在 37℃±1℃下浸提器械表面內(nèi)毒素，再通過(guò) LAL 或 rFC 法檢測(cè)浸提液。不同器械的內(nèi)毒素限值差異明顯：一次性輸液器需≤0.5 EU/device，植入式心臟瓣膜則要求更嚴(yán)格（≤0.06 EU/device）。檢測(cè)時(shí)需注意器械材質(zhì)對(duì)浸提效率的影響，如塑料類(lèi)器械可能吸附內(nèi)毒素，需優(yōu)化浸提時(shí)間（通?！? 小時(shí)）或采用超聲輔助提取，確保殘留內(nèi)毒素被充分檢出。
“低內(nèi)毒素回收（LER）”可能導(dǎo)致內(nèi)毒素檢測(cè)假陰性，對(duì)患者用藥安全構(gòu)成潛在隱患。廣東化學(xué)制藥內(nèi)毒素檢測(cè)商業(yè)化試劑盒

細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品可用于鱟試劑靈敏度復(fù)核、干擾試驗(yàn)，適配凝膠法與光度法實(shí)驗(yàn)。廣東生物制品內(nèi)毒素檢測(cè)法規(guī)要求

內(nèi)毒素檢測(cè)鱟試劑的反應(yīng)受pH的干擾。在進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，要調(diào)節(jié)被測(cè)溶液的pH值，使鱟試劑與供試品溶液的混合溶液pH值落在鱟試劑指定的使用pH范圍內(nèi)（一般鱟試劑作用pH值在6.0~8.0范圍內(nèi))。用于調(diào)節(jié)pH值的試液或溶液（酸或堿)，可采用BET用水配制，并將溶液在無(wú)熱原容器中儲(chǔ)存；必須對(duì)試液或溶液進(jìn)行驗(yàn)證，以證明不含可檢出的內(nèi)毒素并且無(wú)干擾因素。調(diào)節(jié)pH試劑（酸或堿）的添加量，不應(yīng)該超過(guò)供試品的1092。如果超過(guò)10%，則在進(jìn)行計(jì)算時(shí)，將DH試劑的添加量的系數(shù)計(jì)算進(jìn)去。
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