ELISA法宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測橋接驗證

來源： 發(fā)布時間：2025-11-25

宿主細胞蛋白（HCP）是生物制品中源自細胞基質(zhì)的殘留雜質(zhì)，異質(zhì)性特征明顯。其復(fù)雜性主要體現(xiàn)在三方面：①理化特性差異：包含胞內(nèi)與分泌蛋白（涉及關(guān)鍵生理功能），等電點（pI 3-11）、分子量（5-250kDa）及疏水性的區(qū)間跨度大；②上游工藝影響：不同發(fā)酵工藝（如細胞株選擇、培養(yǎng)條件控制）會誘導(dǎo)獨特的翻譯后修飾（PTM），進而增加 HCP 的總量與生化復(fù)雜性；③下游工藝與產(chǎn)物特性干擾：抗體、細胞因子等重組蛋白或病毒類藥物的純化工藝，會選擇性殘留特定 HCP；同時，產(chǎn)物形式（如大腸桿菌的包涵體 / 可溶性表達）也會直接影響 HCP 的殘留譜。針對特定生產(chǎn)工藝開發(fā)定制化檢測方案，是準確監(jiān)控 HCP 殘留的關(guān)鍵所在。
湖州申科系列HCP檢測產(chǎn)品均進行了校準品的表征分析，抗體覆蓋率分析。ELISA法宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測橋接驗證

ELISA法宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測橋接驗證,宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

畢赤酵母（Pichia pastoris）作為第二代酵母表達系統(tǒng)的代表性菌株，已被美國 FDA 認定為 GRAS（一般認為安全）級微生物，具備表達水平高、產(chǎn)物活性優(yōu)、培養(yǎng)成本低、易于擴大至工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)勢。在生物制藥領(lǐng)域，酶制劑、胰島素、表皮生長因子、膠原蛋白等多款生物制劑，已借助畢赤酵母系統(tǒng)實現(xiàn)商業(yè)化生產(chǎn)。和其他產(chǎn)品雜質(zhì)類似，畢赤酵母宿主殘留蛋白（HCP）可能對生物制品的安全性與有效性造成不利影響，故而在生產(chǎn)監(jiān)測、產(chǎn)品放行等環(huán)節(jié)中，需對其開展定量研究并實施嚴格控制。SHENTEK® 畢赤酵母 HCP 殘留檢測試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法），是湖州申科生物自主研發(fā)的畢赤酵母 HCP 通用檢測試劑盒，不僅擁有完全自主知識產(chǎn)權(quán)，還實現(xiàn)了關(guān)鍵試劑的全國產(chǎn)化。該試劑盒適用于對 GS115、X33 等畢赤酵母菌株生產(chǎn)的生物制品中宿主殘留蛋白進行定量檢測，具有操作步驟少、檢測速度快、專一性強、性能穩(wěn)定可靠的特點。
上海宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測性能驗證借助 SHENTEK?AutoElisa-4K HCP 自動化檢測系統(tǒng)，既降低人為偏差，又契合 21CFR Part11 數(shù)據(jù)管理要求。

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在宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測的分析方法里，ELISA法應(yīng)用較多，也是QC日常放行檢測的主要方式。該方法操作相對簡便、檢測精度較好，便于設(shè)定控制范圍與制定技術(shù)規(guī)范，適用于產(chǎn)品開發(fā)及過程控制；不過，ELISA檢測依賴抗原與抗體的特異性結(jié)合，因此以生物制品中HCP為免疫原制備的抗體質(zhì)量，對檢測結(jié)果影響極大。無論是市售ELISA試劑盒，還是實驗室自制的多克隆抗體，若抗體的特異性與適用性不足，都可能導(dǎo)致HCP漏檢，進而給生物制品質(zhì)量安全埋下隱患。另外，ELISA檢測HCP時采用多克隆抗體，無法針對性反映高風(fēng)險HCP殘留蛋白的實際存在狀況。

中國倉鼠卵巢細胞（Chinese Hamster Ovary，CHO）是生物制品生產(chǎn)中常用的動物細胞表達系統(tǒng)，廣泛應(yīng)用于抗體、重組蛋白、疫苗等產(chǎn)品的制備。采用 CHO 細胞作為宿主進行生產(chǎn)時，難免會引入宿主細胞蛋白（HCP）雜質(zhì)；即便 HCP 殘留量較低，仍可能存在免疫原性，還會帶來降低產(chǎn)品蛋白穩(wěn)定性等風(fēng)險。因此，需對生物制品中的 HCP 殘留進行定量分析，從而保障純化工藝的一致性與終產(chǎn)品的安全性。SHENTEK®CHO 宿主細胞蛋白（HCP ）殘留檢測試劑盒實現(xiàn)了關(guān)鍵試劑的全國產(chǎn)化，其通過 CHO 細胞（K1&S）補料分批培養(yǎng)工藝制備 HCPs，再以此免疫綿羊獲取抗體，適用于檢測 CHO 細胞系表達的生物制品（如單抗、重組蛋白、疫苗等）中的 HCP 殘留。該試劑盒具有操作步驟少、檢測速度快、專一性強、性能穩(wěn)定可靠的特點。
在生物制品質(zhì)控領(lǐng)域需要基于產(chǎn)品特性與風(fēng)險分析，聚焦關(guān)鍵質(zhì)控點開發(fā)宿主蛋白殘留檢測方法。

ELISA法宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測橋接驗證,宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

定制化試劑盒之所以成為宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測的優(yōu)先選擇，原因之一在于其構(gòu)建的定制化檢測體系，更契合商業(yè)化生產(chǎn)中HCP工藝雜質(zhì)的控制需求。在HCP校準品與HCP抗體這兩大關(guān)鍵試劑組分符合要求的基礎(chǔ)上，定制化方法的建立與優(yōu)化依托真實的純化中間品及原液樣品開展，通過優(yōu)化檢測條件提升對低濃度HCPs的檢測靈敏度，從而滿足工藝驗證與過程控制的需求。進入臨床三期階段，生產(chǎn)工藝需開展系統(tǒng)驗證，以保障工藝的穩(wěn)定性與可重復(fù)性。此時，定制化HCPELISA檢測方法可更準確地監(jiān)測生產(chǎn)工藝中HCP的去除成效，為工藝驗證提供堅實支撐。在過程控制環(huán)節(jié)，借助工藝特異型HCPELISA檢測方法，可實時監(jiān)測生產(chǎn)過程中的HCP水平，擁有更強的生產(chǎn)異常預(yù)警能力，能及時排查生產(chǎn)風(fēng)險，保障產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。編輯分享將定制化試劑盒用于HCP殘留檢測的優(yōu)勢分點列出推薦一些關(guān)于定制化試劑盒在HCP殘留檢測中應(yīng)用的研究報告除了文中提到的方法，還有哪些可以提高HCP檢測靈敏度的技術(shù)？
HCP具有異質(zhì)性，體現(xiàn)在分子本身的多樣性以及和工藝相關(guān)的變異性。江蘇工藝特異型宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法開發(fā)

不同培養(yǎng)工藝和產(chǎn)物表達影響 HCP 的數(shù)量和生化復(fù)雜性。ELISA法宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測橋接驗證

目前利用 Vero 細胞培養(yǎng)的病毒包括狂犬病病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒等，種類多樣，生產(chǎn)工藝也各有不同。湖州申科生物的 Vero 細胞裂解型 HCP 殘留檢測試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法），針對工藝中 Vero 細胞裂解后產(chǎn)生的大量不同類型 HCPs，可定量檢測采用 Vero 細胞系生產(chǎn)且經(jīng)細胞裂解工藝收獲的生物制品中宿主細胞蛋白殘留，其抗體和校準品可覆蓋近 3000 種蛋白。該試劑盒操作簡便，能提升實驗人員的時間利用效率。抗體覆蓋率分別為 65.1%-85.1%（IMBS-2D）和 76.9%（IMBS-MS，Unique Peptide≥2）。試劑盒嚴格依據(jù) ISO13485 質(zhì)量體系生產(chǎn)，且按法規(guī)要求完成性能驗證，各項性能均滿足 Vero 宿主細胞蛋白檢測需求。
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