E.coli表達(dá)菌宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)試劑盒

湖州申科生物依托先進(jìn)的整合技術(shù)平臺(tái)，在 HCP 檢測(cè)領(lǐng)域構(gòu)筑優(yōu)勢(shì)。公司自主研發(fā)出突破性技術(shù)，包括基于 IMBS 的抗體覆蓋率檢測(cè)方法與基于核酸文庫(kù)的低豐度 HCP 富集技術(shù)，有效提升 HCP 檢測(cè)靈敏度與抗體覆蓋能力，相關(guān)成果已在《中國(guó)新藥雜志》《藥物分析雜志》等期刊發(fā)表，且被納入國(guó)家科技重大專項(xiàng)。同時(shí)，借助前沿的精密分析平臺(tái)，湖州申科打造了覆蓋完整 HCP 分析鏈條的 LC-MS 解決方案，涵蓋抗原一致性評(píng)價(jià)、IMBS 前處理、低豐度蛋白富集、生信分析及專屬數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建等關(guān)鍵環(huán)節(jié)，構(gòu)建起從樣品管理到風(fēng)險(xiǎn)分析的閉環(huán)體系。該平臺(tái)嚴(yán)格遵循法規(guī)要求，所有檢測(cè)技術(shù)均通過符合 ICH 及藥典標(biāo)準(zhǔn)的方法學(xué)驗(yàn)證，確保檢測(cè)數(shù)據(jù)可靠，且滿足生物制品申報(bào)（如 IND/BLA）的法規(guī)要求。憑借這一技術(shù)整合能力，公司已為國(guó)內(nèi)外上百家生物醫(yī)藥企業(yè)提供從工藝開發(fā)到質(zhì)控放行的一站式 HCP 檢測(cè)服務(wù)，助力單抗、疫苗等產(chǎn)品提升安全性與合規(guī)性。

宿主細(xì)胞蛋白（HCP）是生物制品中源自細(xì)胞基質(zhì)的殘留雜質(zhì)，異質(zhì)性特征明顯。其復(fù)雜性主要體現(xiàn)在三方面：①理化特性差異：包含胞內(nèi)與分泌蛋白（涉及關(guān)鍵生理功能），等電點(diǎn)（pI 3-11）、分子量（5-250kDa）及疏水性的區(qū)間跨度大；②上游工藝影響：不同發(fā)酵工藝（如細(xì)胞株選擇、培養(yǎng)條件控制）會(huì)誘導(dǎo)獨(dú)特的翻譯后修飾（PTM），進(jìn)而增加 HCP 的總量與生化復(fù)雜性；③下游工藝與產(chǎn)物特性干擾：抗體、細(xì)胞因子等重組蛋白或病毒類藥物的純化工藝，會(huì)選擇性殘留特定 HCP；同時(shí)，產(chǎn)物形式（如大腸桿菌的包涵體 / 可溶性表達(dá)）也會(huì)直接影響 HCP 的殘留譜。針對(duì)特定生產(chǎn)工藝開發(fā)定制化檢測(cè)方案，是準(zhǔn)確監(jiān)控 HCP 殘留的關(guān)鍵所在。

宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留監(jiān)測(cè)是生物藥物生產(chǎn)中的關(guān)鍵質(zhì)量屬性（Critical Quality Attribute, CQA），需在藥物開發(fā)與生產(chǎn)階段對(duì) HCP 的存在實(shí)施嚴(yán)格監(jiān)控、管理及記錄。隨著生產(chǎn)流程推進(jìn)，生物制品目標(biāo)蛋白純度逐步提升，HCP 含量則相應(yīng)持續(xù)下降，這導(dǎo)致對(duì)單抗、融合蛋白等富含目標(biāo)蛋白的下游工藝樣品進(jìn)行 HCP 分析監(jiān)測(cè)時(shí)，難度明顯增加。在此背景下，高效的 HCP 富集材料與技術(shù)顯得尤為重要。SHENTEK^®AbunProteoX 是基于磁珠構(gòu)建的親和配體，能高效識(shí)別并結(jié)合目標(biāo)蛋白；借助磁性納米顆粒的獨(dú)特特性，它可快速高效捕獲 HCP，大幅提升檢測(cè)靈敏度。此外，該親和配體的普遍適用性，讓 AbunProteoX 處理多種生物樣本時(shí)表現(xiàn)優(yōu)異，可確保樣品中存在高濃度目標(biāo)蛋白時(shí)，對(duì)低濃度 HCP 的質(zhì)譜、電泳等檢測(cè)分析具備準(zhǔn)確性與可靠性。

湖州申科生物憑借自主可控的供應(yīng)鏈與經(jīng)嚴(yán)格驗(yàn)證的技術(shù)性能，確保 HCP 檢測(cè)試劑盒的長(zhǎng)期穩(wěn)定供應(yīng)及出色分析能力。一方面，公司實(shí)現(xiàn)關(guān)鍵物料自研自產(chǎn)：校準(zhǔn)品通過凍干工藝大規(guī)模生產(chǎn)，能穩(wěn)定儲(chǔ)存 10 年以上；抗體經(jīng)大動(dòng)物免疫制備，產(chǎn)量可支撐≥10,000 盒試劑盒生產(chǎn)，確保同批次抗體連續(xù)供應(yīng)超 10 年；試劑盒經(jīng)多批次驗(yàn)證，批內(nèi)與批間一致性表現(xiàn)良好。另一方面，所有產(chǎn)品均參照 ICH Q2（R2）及 ICH M10 法規(guī)要求完成驗(yàn)證：以大腸桿菌（E.coli）HCP 產(chǎn)品為例，其線性范圍（1-243 ng/mL）的 R2>0.999，各濃度點(diǎn)回收率偏差≤5%；準(zhǔn)確度處于 81.2%-111.6% 區(qū)間，中間精密度 CV 值為 5.7%-12.4%；定量限（LLOQ）低至 1.5 ng/mL，且對(duì) CHO、HEK293 等多種宿主細(xì)胞的交叉反應(yīng)均低于檢測(cè)限。同時(shí)，借助二維電泳（檢出 826 個(gè)蛋白點(diǎn)）與質(zhì)譜法（鑒定 2204 個(gè)蛋白點(diǎn)）對(duì)校準(zhǔn)品進(jìn)行雙重表征，并運(yùn)用 IMBS-2D（覆蓋率 > 70%）與 IMBS-MS（覆蓋率 84.7%）正交技術(shù)驗(yàn)證抗體覆蓋率，從源頭保障檢測(cè)結(jié)果的全面性與可靠性。

LC-MS/MS 作為成熟穩(wěn)定的蛋白質(zhì)組學(xué)分析技術(shù)，依托超高分辨率與準(zhǔn)確度，在生物分析領(lǐng)域中占據(jù)關(guān)鍵地位。該技術(shù)不僅可對(duì)低含量宿主細(xì)胞殘留蛋白（HCP）開展定性檢測(cè)，還能通過構(gòu)建專屬蛋白質(zhì)譜庫(kù)準(zhǔn)確鑒定 HCP 的具體種類，為深度解析殘留蛋白組成提供重要支撐。不過該技術(shù)應(yīng)用中面臨的主要挑戰(zhàn)，是如何優(yōu)化 LC-MS 方法以契合 GMP 規(guī)范對(duì)產(chǎn)品放行檢測(cè)的嚴(yán)苛要求。在質(zhì)譜檢測(cè)環(huán)節(jié)，引入表征明確的內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)蛋白，可準(zhǔn)確分析 HCPs 的整體組成，并有效識(shí)別其中具有潛在風(fēng)險(xiǎn)的高風(fēng)險(xiǎn)蛋白。這一技術(shù)手段不僅為開發(fā)產(chǎn)品專屬 HCP ELISA 檢測(cè)方法提供有力數(shù)據(jù)支撐，還可助力工藝優(yōu)化升級(jí)，加快推進(jìn)生物制品從研發(fā)到獲批上市的全流程進(jìn)度。

宿主細(xì)胞殘留蛋白（HCP）檢測(cè)是生物制品質(zhì)量控制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，當(dāng)前主流技術(shù)為基于抗體的免疫學(xué)方法（如 ELISA）。但實(shí)際檢測(cè)中，不同試劑盒的結(jié)果常存在明顯偏差，關(guān)鍵問題源于其兩大關(guān)鍵組分 ——HCP 校準(zhǔn)品與檢測(cè)抗體 —— 在制備及表征上的高度可變性。作為定量基準(zhǔn)的校準(zhǔn)品，自身復(fù)雜性極高。不同供應(yīng)商制備時(shí)，所用細(xì)胞來源、培養(yǎng)及表達(dá)條件存在明顯差異，且宿主蛋白的提取純化工藝（如目標(biāo)產(chǎn)物去除策略）也各不相同，這些差異直接導(dǎo)致校準(zhǔn)品的組成、對(duì)實(shí)際樣品的代表性及儲(chǔ)存穩(wěn)定性千差萬別。檢測(cè)抗體（尤其是多克隆抗體）需通過免疫動(dòng)物獲得，其特異性與 HCP 覆蓋度受多重因素影響：免疫原的選擇、動(dòng)物個(gè)體免疫應(yīng)答差異、免疫方案設(shè)計(jì)，以及后續(xù)抗體篩選與純化流程，都會(huì)讓不同批次或來源的抗體，在對(duì)不同 HCP 的親和力、對(duì)低豐度蛋白的檢測(cè)靈敏度等識(shí)別譜特性上，形成本質(zhì)區(qū)別。