福建熱原檢測操作步驟

來源： 發(fā)布時間：2025-11-27

相較于傳統(tǒng)家兔法，熱原檢測MAT法在動物福利、檢測性能、適用范圍等方面具有明顯優(yōu)勢。從動物福利看，MAT法使用分離培養(yǎng)的單核細(xì)胞系（如湖州申科 HL-60 細(xì)胞系），無需動物，完全符合 “減少、替代、優(yōu)化” 的 3R 原則，規(guī)避家兔法的倫理爭議與飼養(yǎng)成本。檢測性能上，家兔法只能定性且靈敏度低（檢測限≥5EU/kg），結(jié)果受動物個體差異、環(huán)境溫度影響大；MAT 法可定量檢測，標(biāo)曲線性范圍 0.0125-1.0EU/mL，檢測限（LOD）達(dá) 0.0125EU/mL，批間 CV≤25%，重復(fù)性更優(yōu)。適用范圍方面，家兔法不適用于放射性質(zhì)藥物、基因療法制劑等可能影響動物體溫的產(chǎn)品；MAT法適配疫苗、血制品、抗體藥、化藥等幾乎所有類型樣品，且支持高通量檢測，單塊 96 孔板可同時分析多個樣品，檢測時間從家兔法的3-7天縮短至1.5天，大幅提升效率。
當(dāng)熱原侵入人體循環(huán)系統(tǒng)，單核細(xì)胞表面的TLR即刻化身分子雷達(dá)，準(zhǔn)確捕獲LPS、LTA等外源致熱物。福建熱原檢測操作步驟

福建熱原檢測操作步驟,熱原檢測

家兔熱原試驗作為熱原檢測領(lǐng)域的 “法定傳統(tǒng)方法”，被中國藥典（ChP）、美國藥典（USP）、歐洲藥典（EP）均列為法定檢測項目，其主要優(yōu)勢在于可通過家兔體溫應(yīng)答篩查所有類型熱原，尤其適用于無法排除非內(nèi)毒素?zé)嵩廴镜母唢L(fēng)險產(chǎn)品，如血液制品、放射性質(zhì)藥物及部分生物制劑。然而，家兔熱原試驗存在明顯局限：動物個體差異大，需額外投入時間與成本篩選合格家兔；檢測周期長（至少 6 小時），無法滿足生物制品快速放行需求；靈敏度較低（對 LPS 檢測限≥5EU/kg），與全球倡導(dǎo)的“動物福利3R原則”背道而馳。
山西疫苗熱原檢測湖州申科熱原檢測試劑盒中單核細(xì)胞系表面有多種Toll樣受體，可響應(yīng)革蘭氏陽性菌、病毒等熱原。

福建熱原檢測操作步驟,熱原檢測

湖州申科生物熱原檢測（MAT法） 試劑盒在靈敏度、穩(wěn)定性與適用性上表現(xiàn)突出，關(guān)鍵性能參數(shù)符合藥典要求：標(biāo)曲線性范圍 0.0125-1.0EU/mL，相關(guān)系數(shù) R2≥0.98，定量限 0.025EU/mL，檢測限（LOD）0.0125EU/mL，批間精密度 CV≤25%，可準(zhǔn)確捕捉微量熱原。其優(yōu)勢在于特定的單核細(xì)胞系 —— 與依賴供體血液的 PBMC 細(xì)胞不同，申科 MAT 細(xì)胞系來源清晰可溯源，無需倫理審批與血站合作，規(guī)避供體差異導(dǎo)致的檢測波動。對比同類型產(chǎn)品（如國外廠家 PBMC 細(xì)胞），申科細(xì)胞系的標(biāo)曲各濃度點 CV 更低（ 低至3.6%）、相對偏差更?。?nbsp;12.31%），線性 R2 達(dá) 1.000，穩(wěn)定性更優(yōu)。此外，細(xì)胞凍存液組分經(jīng)優(yōu)化，復(fù)蘇后活率高，無需額外調(diào)整細(xì)胞狀態(tài)即可直接與供試品共孵育，操作便捷；且適配任何具備 450nm 波長的酶標(biāo)儀，無需專門的設(shè)備，降低實驗室投入成本。

PyroSHENTEK®熱原檢測試劑盒依據(jù) ICH Q2 (R2)、《中國藥典》（如通則 9301）及歐洲藥典（EP 2.6.30）要求，完成了線性、范圍、定量限、準(zhǔn)確度、精密度、耐用性等全維度性能驗證。線性方面，0.0125-1.0EU/mL范圍內(nèi)擬合良好，R2≥0.98；準(zhǔn)確度通過加標(biāo)回收實驗驗證，不同樣品基質(zhì)（如生物制品、化學(xué)制藥原料）的回收率均落在 50%-200% 區(qū)間；精密度表現(xiàn)優(yōu)異，批內(nèi)與批間 CV 均≤15%，且無論是 3 復(fù)孔還是 4 復(fù)孔檢測均能達(dá)標(biāo)。此外，試劑盒使用中國藥典推薦的 MAT 特定標(biāo)準(zhǔn)品，可直接用于國內(nèi)外申報，契合全球 “3R 原則” 監(jiān)管導(dǎo)向—尤其適配《歐洲藥典》刪除家兔法、《美國藥典》鼓勵 MAT 替代等新法規(guī)趨勢，為企業(yè)應(yīng)對不同地區(qū)的熱原檢測合規(guī)要求提供有力支持。
憑借深厚的專業(yè)積累，湖州申科生物為行業(yè)提供可靠的熱原檢測解決方案。

福建熱原檢測操作步驟,熱原檢測

單核細(xì)胞活化反應(yīng)測定（MAT）是近年來熱原檢測領(lǐng)域的突破性技術(shù)，其原理基于人體免疫系統(tǒng)對熱原的天然應(yīng)答機(jī)制：人源單核細(xì)胞（如 THP-1 細(xì)胞系或新鮮人全血單核細(xì)胞）在熱原刺激下，會活化胞內(nèi)炎癥信號通路，釋放 IL-6、TNF-α 等促炎細(xì)胞因子，通過 ELISA 檢測細(xì)胞因子的濃度，即可間接反映樣品中熱原的總量與活性。與傳統(tǒng)檢測方法相比，MAT 法具備三大不可替代的優(yōu)勢：一是廣譜性，可同時檢測細(xì)菌內(nèi)毒素、病毒、真菌毒素、支原體等所有類型熱原，填補(bǔ)了鱟試驗法只能檢測內(nèi)毒素的 “非內(nèi)毒素?zé)嵩^(qū)”，尤其適用于疫苗、基因治療產(chǎn)品等易受多種熱原污染的高風(fēng)險產(chǎn)品；二是人源相關(guān)性，采用與人體同源的細(xì)胞模型，檢測結(jié)果更貼近臨床實際熱原反應(yīng)，避免家兔試驗中動物種屬差異導(dǎo)致的誤判；三是高靈敏度，對細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測限可達(dá) 0.0125EU/mL，對非內(nèi)毒素?zé)嵩ㄈ缃湍付嗵?、腺病毒）的檢測限低至 ng/pg 級，滿足低限值產(chǎn)品的質(zhì)控需求。
家兔法熱原試驗雖能篩查所有類別熱原，卻因周期長、成本高、靈敏度低而逐步被體外方法取代。山西疫苗熱原檢測

PBMC（外周血單個核細(xì)胞）用于 MAT 檢測時供體差異大，IL-6 釋放波動明顯，標(biāo)準(zhǔn)化難度高于單核細(xì)胞系。福建熱原檢測操作步驟

PyroSHENTEK®熱原檢測試劑盒（MAT法）已完成 25 個品種樣品的檢測驗證，覆蓋單抗類、疫苗類、基因工程類、血液制品類、生化藥品類與注射液，結(jié)果顯示其適配性范圍廣但需關(guān)注部分樣品的干擾。疫苗類（如麻腮風(fēng)聯(lián)合減毒活疫苗、人用狂犬病疫苗）、基因工程類（重組人促紅素、干擾素 α-2b）、血液制品類（人血白蛋白、凝血因子 Ⅷ）與注射液（生理鹽水、琥珀酰明膠）的加標(biāo)回收率均在 50%-200% 范圍內(nèi)，無明顯干擾，檢測結(jié)果可靠。單抗類（如貝伐珠單抗、阿達(dá)木單抗）、中藥注射液等樣品雖存在不同程度的抑制作用，需通過提高稀釋倍數(shù)（如稀釋至 MVD 上限）、超聲處理或添加中和劑消除抑制，優(yōu)化后回收率均可達(dá)標(biāo)。此外，MAT 法可有效檢測非內(nèi)毒素?zé)嵩?，如對貝伐珠單抗注射液中添加的酵母多糖（Zymosan，200μg/mL）、脂磷壁酸（LTA，10μg/mL），回收率分別達(dá) 113%、66.8%，證明其可解決傳統(tǒng)鱟試劑漏檢非內(nèi)毒素?zé)嵩膯栴}，尤其適用于高風(fēng)險生物制品的熱原防控。
福建熱原檢測操作步驟