廣東免疫細(xì)胞產(chǎn)品支原體檢測(cè)NAT法

來源： 發(fā)布時(shí)間：2025-12-02

對(duì)照菌株的合理配置是支原體培養(yǎng)法檢測(cè)準(zhǔn)確性的重要保障，湖州申科嚴(yán)格遵循 USP 標(biāo)準(zhǔn)制定菌株使用規(guī)范。每次檢測(cè)需至少包含兩株已知支原體菌株：一株為葡萄糖發(fā)酵型（如肺炎支原體或其等效種株），另一株為精氨酸水解型（如口腔支原體），通過兩類菌株的平行對(duì)照，覆蓋常見支原體檢測(cè)場(chǎng)景。特殊場(chǎng)景下需額外補(bǔ)充菌株：檢測(cè)昆蟲細(xì)胞系時(shí)，需納入螺原體（如 S.citri ATCC 29747、S.melliferum ATCC 29416 或等效菌種菌株），這類菌株?duì)I養(yǎng)需求更苛刻，且需匹配昆蟲細(xì)胞系對(duì)應(yīng)的較低孵化溫度，確保特殊樣品檢測(cè)的針對(duì)性與有效性，避免因菌株配置不全導(dǎo)致漏檢風(fēng)險(xiǎn)。
支原體標(biāo)準(zhǔn)菌株對(duì)支原體檢測(cè)試劑盒的選擇、使用及驗(yàn)證至關(guān)重要。廣東免疫細(xì)胞產(chǎn)品支原體檢測(cè)NAT法

廣東免疫細(xì)胞產(chǎn)品支原體檢測(cè)NAT法,支原體檢測(cè)

湖州申科外源因子全自動(dòng)核酸檢測(cè)分析系統(tǒng)打造了 “樣本進(jìn)、結(jié)果出” 的高效檢測(cè)流程，徹底簡(jiǎn)化支原體檢測(cè)操作。檢測(cè)只需一步式加樣，最大支持 1mL 樣本直接上樣，無需復(fù)雜前處理，加樣后系統(tǒng)自動(dòng)完成核酸提取與檢測(cè)，全程 3 小時(shí)內(nèi)即可獲取結(jié)果，其中樣本準(zhǔn)備時(shí)間不足 5 分鐘，檢測(cè)流程只需 2.5 小時(shí)。相比傳統(tǒng)方法水浴消化、磁珠分離、洗脫等繁瑣步驟，該系統(tǒng)操作極大簡(jiǎn)化，且配備 UI 觸屏控制系統(tǒng)，內(nèi)置標(biāo)準(zhǔn)化程序，支持掃碼啟動(dòng)檢測(cè)，無需專業(yè) qPCR 操作培訓(xùn)，普通人員經(jīng)簡(jiǎn)單指導(dǎo)即可上手。系統(tǒng)采用 4 通道單獨(dú)運(yùn)行設(shè)計(jì)，可同步開展不同樣本檢測(cè)，儀器還支持疊加延展通道，進(jìn)一步提升檢測(cè)產(chǎn)能，適配生物藥多批次檢測(cè)需求。
湖南復(fù)雜基質(zhì)支原體檢測(cè)技術(shù)服務(wù)湖州申科支原體驗(yàn)證菌株溯源至 ATCC/CVCC，標(biāo)定 10CFU/100CFU，滿足驗(yàn)證需求。

廣東免疫細(xì)胞產(chǎn)品支原體檢測(cè)NAT法,支原體檢測(cè)

湖州申科支原體檢測(cè)解決方案優(yōu)勢(shì)突出，一是產(chǎn)品驗(yàn)證專業(yè)：嚴(yán)格確認(rèn)菌株 GC 比，可溯源至 ATCC/CVCC，專屬性驗(yàn)證涵蓋多種梭菌、乳桿菌、鏈球菌，完全符合 EP 要求，而部分競(jìng)品未明確菌株驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)或缺乏近緣菌交叉污染測(cè)試；二是菌株資源豐富：提供可溯源、可商用的驗(yàn)證菌株，嚴(yán)格控制 GC 比，聯(lián)合合規(guī)機(jī)構(gòu)共同標(biāo)定；三是一站式解決方案：涵蓋 “產(chǎn)品 + 菌株 + 技術(shù)服務(wù)” 全鏈條，擁有上市藥物方法變更驗(yàn)證服務(wù)案例，可提供全申報(bào)周期支持；四是申報(bào)案例豐富：積累了 BLA、IND 階段的多個(gè)成功案例，支持客戶完成國產(chǎn)替代與方法變更，競(jìng)品申報(bào)案例相對(duì)有限，且部分企業(yè)規(guī)模較小，難以接受供應(yīng)商審計(jì)，服務(wù)穩(wěn)定性不足。

目前支原體檢測(cè)主要有培養(yǎng)法、指示細(xì)胞培養(yǎng)法和核酸擴(kuò)增技術(shù)（NAT）法三類，三者在性能與適用場(chǎng)景上差異明顯。培養(yǎng)法作為檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)，靈敏度極高，但檢測(cè)周期長(zhǎng)達(dá) 28 天，手動(dòng)操作需數(shù)天，依賴較高水平的操作技能，且因使用活菌株作為陽性質(zhì)控，污染風(fēng)險(xiǎn)高，需在特殊實(shí)驗(yàn)室開展，檢測(cè)前還需進(jìn)行培養(yǎng)基靈敏度驗(yàn)證。指示細(xì)胞培養(yǎng)法為藥典認(rèn)可的傳統(tǒng)方法，成本較低，但檢測(cè)周期仍需 14-20 天，靈敏度偏低，同樣存在活菌株污染風(fēng)險(xiǎn)，無法滿足快速放行需求。NAT 法（核酸擴(kuò)增法）檢測(cè)周期只需 3-7 小時(shí)，手動(dòng)操作時(shí)間為數(shù)小時(shí)，采用滅活菌株降低污染風(fēng)險(xiǎn)，樣本需求量少、靈敏度高，但無法區(qū)分死菌與活菌，且需要開展充分驗(yàn)證，對(duì)操作人員的專業(yè)技能有一定要求，已逐步成為生物制藥企業(yè)產(chǎn)品放行檢測(cè)的youxia方案。
支原體檢測(cè)試劑盒批間穩(wěn)定性至關(guān)重要，需通過多批次驗(yàn)證確保質(zhì)量均一。

廣東免疫細(xì)胞產(chǎn)品支原體檢測(cè)NAT法,支原體檢測(cè)

質(zhì)控結(jié)果是支原體 NAT 檢測(cè)可靠性的前提，需嚴(yán)格遵循判定標(biāo)準(zhǔn)，且需結(jié)合實(shí)驗(yàn)室實(shí)際條件驗(yàn)證適配的標(biāo)準(zhǔn)閾值。質(zhì)控樣品的判定規(guī)則明確：NTC（無模板對(duì)照）的 FAM 信號(hào)需 2 復(fù)孔 Ct≥40 或無明顯擴(kuò)增曲線，VIC 信號(hào)需 2 復(fù)孔 Ct<35 且呈有效 “S” 型擴(kuò)增；NCS（陰性對(duì)照）判定標(biāo)準(zhǔn)與 NTC 一致；PC（陽性質(zhì)控）的 FAM 信號(hào)需 2 復(fù)孔 Ct<35 且呈有效 “S” 型擴(kuò)增，PCS（陽性對(duì)照底物）判定標(biāo)準(zhǔn)與 PC 一致。只有質(zhì)控結(jié)果全部滿足要求，才能進(jìn)一步分析樣本結(jié)果，若質(zhì)控不達(dá)標(biāo)，需排查設(shè)備、試劑、操作等環(huán)節(jié)的問題并重新檢測(cè)。
培養(yǎng)基、血清等原輔料入庫前需做支原體檢測(cè)，排除外源污染風(fēng)險(xiǎn)。廣東免疫細(xì)胞產(chǎn)品支原體檢測(cè)NAT法

支原體污染會(huì)改變細(xì)胞生理特性，導(dǎo)致生長(zhǎng)緩慢、基因表達(dá)異常，需嚴(yán)格防控。廣東免疫細(xì)胞產(chǎn)品支原體檢測(cè)NAT法

陰性翹尾是支原體 NAT 檢測(cè)中常見的異?，F(xiàn)象，表現(xiàn)為 NCS 或 NTC 出現(xiàn)擴(kuò)增信號(hào)，Ct 值多在 35~40 之間，需科學(xué)評(píng)估并處理。首先考慮污染因素，可能是陰性對(duì)照被陽性樣本、試劑或環(huán)境氣溶膠污染，建議立即復(fù)測(cè)，復(fù)測(cè)時(shí)使用帶濾芯低吸附 TIP 頭，嚴(yán)格執(zhí)行陰陽性分區(qū)操作，注重細(xì)節(jié)防控。其次需排除背景信號(hào)等非典型性擴(kuò)增的干擾，避免誤判為污染。若前期驗(yàn)證中頻繁出現(xiàn) NTC 或 NCS 擴(kuò)增，且已徹底排除污染可能性，可結(jié)合已有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)重新設(shè)置 Cut off 值，確保閾值線能有效區(qū)分真實(shí)陽性與背景信號(hào)，滿足實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)需求。
廣東免疫細(xì)胞產(chǎn)品支原體檢測(cè)NAT法