浙江疫苗產(chǎn)品支原體檢測指示細(xì)胞培養(yǎng)法

來源： 發(fā)布時(shí)間：2025-12-05

2023 年美國國立衛(wèi)生研究院（NIH）的對(duì)比研究得出一個(gè)結(jié)論是并非所有商業(yè)化支原體檢測試劑盒都能滿足替代傳統(tǒng)方法的要求，研究對(duì)市面上 5 款主流試劑盒（ATCC、梅里埃、賽默飛、羅氏、MB）進(jìn)行測試，發(fā)現(xiàn)不同試劑盒對(duì)不同支原體菌株的檢測靈敏度差異明顯，部分產(chǎn)品無法達(dá)到宣稱的≤10 CFU/mL 檢測限（符合歐、日藥典替代培養(yǎng)法的要求）。例如，ATCC 試劑盒對(duì)萊氏無膽甾原體、精氨酸支原體的檢測限只為 100 CFU/mL，MB 試劑盒對(duì)硬蜱螺原體無法檢出（>1000 CFU/mL）。這一現(xiàn)象表明，試劑盒的檢測性能與支原體菌株特性密切相關(guān)，因此企業(yè)需根據(jù)待測樣品的原輔料來源和檢測目的，對(duì)試劑盒進(jìn)行嚴(yán)格的性能驗(yàn)證，避免因檢測限不達(dá)標(biāo)導(dǎo)致質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)。
支原體檢測需驗(yàn)證專屬性，避免與革蘭氏陽性菌交叉反應(yīng)，確保結(jié)果準(zhǔn)確。浙江疫苗產(chǎn)品支原體檢測指示細(xì)胞培養(yǎng)法

浙江疫苗產(chǎn)品支原體檢測指示細(xì)胞培養(yǎng)法,支原體檢測

支原體檢測 NAT 方法驗(yàn)證需滿足全球藥典對(duì)檢測限、專屬性、耐用性、可比性等關(guān)鍵指標(biāo)的要求，且 EP、USP 新草案提出更嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)。檢測限（LOD）方面，EP 要求針對(duì)每種支原體確定臨界值，需 3 次單獨(dú) 10 倍梯度稀釋、共 24 個(gè)檢測數(shù)據(jù)，95% 檢出濃度達(dá)標(biāo)；USP 要求標(biāo)準(zhǔn)菌株濃度≤10 CFU/mL 或 100 GC/mL，≥24 次檢測數(shù)據(jù)支持統(tǒng)計(jì)分析；ChP 未明確支原體專屬要求，但需滿足 “微生物檢出下限數(shù)量” 設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)。專屬性上，EP 建議測試革蘭氏陽性菌交叉污染，USP 要求生信分析與實(shí)際樣品驗(yàn)證結(jié)合，ChP 強(qiáng)調(diào)外來成分不干擾試驗(yàn)。耐用性方面，EP 需驗(yàn)證試劑濃度、提取與反應(yīng)程序變化，USP 涵蓋設(shè)備、反應(yīng)體系等參數(shù)波動(dòng)?？杀刃陨?，EP 要求 NAT 法與藥典法 LOD 及特異性對(duì)比，替代培養(yǎng)法需達(dá) 10 CFU/mL，替代指示細(xì)胞法需達(dá) 100 CFU/mL，USP 則視樣品基質(zhì)情況要求可比性研究。
天津干細(xì)胞產(chǎn)品支原體檢測可比性驗(yàn)證支原體污染來源多樣，包括人源、動(dòng)物源及環(huán)境，需多方位監(jiān)測。

浙江疫苗產(chǎn)品支原體檢測指示細(xì)胞培養(yǎng)法,支原體檢測

湖州申科支原體檢測解決方案優(yōu)勢突出，一是產(chǎn)品驗(yàn)證專業(yè)：嚴(yán)格確認(rèn)菌株 GC 比，可溯源至 ATCC/CVCC，專屬性驗(yàn)證涵蓋多種梭菌、乳桿菌、鏈球菌，完全符合 EP 要求，而部分競品未明確菌株驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)或缺乏近緣菌交叉污染測試；二是菌株資源豐富：提供可溯源、可商用的驗(yàn)證菌株，嚴(yán)格控制 GC 比，聯(lián)合合規(guī)機(jī)構(gòu)共同標(biāo)定；三是一站式解決方案：涵蓋 “產(chǎn)品 + 菌株 + 技術(shù)服務(wù)” 全鏈條，擁有上市藥物方法變更驗(yàn)證服務(wù)案例，可提供全申報(bào)周期支持；四是申報(bào)案例豐富：積累了 BLA、IND 階段的多個(gè)成功案例，支持客戶完成國產(chǎn)替代與方法變更，競品申報(bào)案例相對(duì)有限，且部分企業(yè)規(guī)模較小，難以接受供應(yīng)商審計(jì)，服務(wù)穩(wěn)定性不足。

全球主流藥典均認(rèn)可 NAT 法作為支原體檢測的替代方法，但明確要求需經(jīng)過充分驗(yàn)證并證明與傳統(tǒng)方法的可比性。歐洲藥典（EP）2.6.7 規(guī)定 NAT 法可作為替代方法，需開展供試品抑制性驗(yàn)證；美國藥典（USP）63&77 要求替代方法需與培養(yǎng)法、指示細(xì)胞培養(yǎng)法均具備可比性，且 USP<77> 專門針對(duì)支原體 NAT 法的驗(yàn)證與檢測制定了規(guī)范；日本藥典（JP）G3-14-170 允許經(jīng)適當(dāng)驗(yàn)證后的 NAT 法替代傳統(tǒng)方法；中國藥典 3301 及相關(guān)指導(dǎo)原則明確，CAR-T、干細(xì)胞等新型產(chǎn)品可采用 NAT 法，但需充分驗(yàn)證其最低檢出限不低于藥典方法，早期需與藥典方法并行使用。此外，各國法規(guī)均強(qiáng)調(diào)，NAT 法的選擇、開發(fā)與應(yīng)用需基于科學(xué)依據(jù)，充分考慮培養(yǎng)基、生產(chǎn)工藝、潛在污染菌株等因素。
實(shí)驗(yàn)室需分區(qū)操作支原體檢測，避免陰陽性樣本交叉污染，配備單獨(dú)耗材。

浙江疫苗產(chǎn)品支原體檢測指示細(xì)胞培養(yǎng)法,支原體檢測

對(duì)照菌株的合理配置是支原體培養(yǎng)法檢測準(zhǔn)確性的重要保障，湖州申科嚴(yán)格遵循 USP 標(biāo)準(zhǔn)制定菌株使用規(guī)范。每次檢測需至少包含兩株已知支原體菌株：一株為葡萄糖發(fā)酵型（如肺炎支原體或其等效種株），另一株為精氨酸水解型（如口腔支原體），通過兩類菌株的平行對(duì)照，覆蓋常見支原體檢測場景。特殊場景下需額外補(bǔ)充菌株：檢測昆蟲細(xì)胞系時(shí)，需納入螺原體（如 S.citri ATCC 29747、S.melliferum ATCC 29416 或等效菌種菌株），這類菌株?duì)I養(yǎng)需求更苛刻，且需匹配昆蟲細(xì)胞系對(duì)應(yīng)的較低孵化溫度，確保特殊樣品檢測的針對(duì)性與有效性，避免因菌株配置不全導(dǎo)致漏檢風(fēng)險(xiǎn)。
支原體檢測過程中，需嚴(yán)格遵循 “先陰后陽” 操作原則，避免交叉污染。福建生物制品支原體檢測使用性驗(yàn)證

支原體檢測試劑盒需覆蓋常見污染菌株，避免因菌株遺漏導(dǎo)致漏檢。浙江疫苗產(chǎn)品支原體檢測指示細(xì)胞培養(yǎng)法

MycoSHENTEK® 支原體 DNA 檢測試劑盒參照 EP 2.6.7 和 JP XVII 支原體檢測相關(guān)要求完成全面性能驗(yàn)證，是經(jīng)過三方室間驗(yàn)證、性能完全符合藥典標(biāo)準(zhǔn)的支原體檢測試劑盒。該試劑盒檢測靈敏度高達(dá) 10CFU/mL，可同時(shí)替代傳統(tǒng)培養(yǎng)法與指示細(xì)胞培養(yǎng)法，大幅縮短檢測周期。經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，其對(duì)雞滑液支原體、豬鼻支原體、萊氏無膽甾支原體等多種常見污染菌株的檢出率均達(dá)到 100%（24/24），即使對(duì)口腔支原體等低濃度菌株，檢出率也滿足 95% 以上。憑借覆蓋范圍廣、靈敏度高、性能穩(wěn)定、合規(guī)性強(qiáng)的關(guān)鍵優(yōu)勢，該試劑盒為生物制品企業(yè)提供了高效、可靠的支原體檢測工具，助力企業(yè)滿足全球監(jiān)管要求并保障產(chǎn)品質(zhì)量。
浙江疫苗產(chǎn)品支原體檢測指示細(xì)胞培養(yǎng)法