ROX通常并不指代一種特定的熒光定量PCR儀,而是一種熒光染料,在熒光定量PCR中常被用作被動參考染料。其作用是用于校正熒光信號,減少孔與孔之間由于加樣誤差、反應體積差異、光學系統(tǒng)的微小變化以及蒸發(fā)等因素導致的熒光信號波動,提高實驗的準確性和重復性。在實時熒光定量PCR儀的使用中,很多儀器都可以兼容ROX染料進行信號校正。例如,賽默飛世爾的QuantStudio系列、ABI的7500、7900等型號的熒光定量PCR儀都支持ROX染料。不同的熒光定量PCR儀在檢測通道、光學系統(tǒng)、熱循環(huán)性能等方面存在差異,但只要其具備相應的熒光檢測通道,能夠檢測ROX染料的熒光信號,并在軟件中支持以ROX信號作為參考進行數(shù)據(jù)校正,就可以在實驗中使用ROX染料來輔助提高定量分析的準確性。例如,QuantStudio1實時熒光定量PCR儀采用新型Optiflex光學檢測架構(gòu),提供FAM、VIC和ROX三種常用激發(fā)和發(fā)射濾光片,實現(xiàn)3重實時定量分析。對于一些隱性遺傳疾病,熒光定量 PCR 儀可用于檢測個體是否為致病基因的攜帶者。泰州Cy5熒光定量PCR儀型號

熒光定量PCR儀具有高靈敏度、高特異性和精確定量等特點,被廣泛應用于多個行業(yè),以下是一些主要的應用行業(yè):食品行業(yè)食品安全檢測:可檢測食品中的致病微生物,如大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等,以及食品中的轉(zhuǎn)基因成分,保障食品安全,維護消費者的健康權(quán)益。食品溯源:通過對食品中特定 DNA 序列的檢測和分析,實現(xiàn)對食品原料的來源追溯和產(chǎn)品質(zhì)量的全程監(jiān)控,有助于建立健全食品質(zhì)量安全追溯體系。環(huán)境監(jiān)測行業(yè)微生物群落分析:對環(huán)境樣品中的微生物進行定量分析和群落結(jié)構(gòu)研究,了解不同環(huán)境中微生物的種類、數(shù)量和分布規(guī)律,評估環(huán)境質(zhì)量和生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性。污染物降解菌檢測:篩選和檢測環(huán)境中具有污染物降解能力的微生物菌株,為生物修復技術提供理論依據(jù)和菌種資源,推動環(huán)境污染治理和生態(tài)修復工作的開展。泰州HEX熒光定量PCR儀檢測受到儀器的整體性能、光學系統(tǒng)設計、熒光染料質(zhì)量以及數(shù)據(jù)處理算法等多種因素的綜合影響。

選擇適合自己的熒光定量 PCR 儀,需要綜合考慮多個因素,實驗類型:如果是進行常規(guī)的基因表達分析、病原體定量檢測,普通的單通道或多通道熒光定量 PCR 儀即可滿足需求。例如,賽默飛世爾的 QuantStudio 3,適用于基礎的基因表達和病原體檢測實驗。若是涉及到復雜的多重 PCR 實驗、SNP 基因分型,則需要選擇具有更多熒光通道、更高分辨率的儀器,如羅氏的 LightCycler 480,可同時檢測多個熒光信號,適用于多重分析。通量要求:根據(jù)實驗樣本數(shù)量來選擇。對于樣本量較少的實驗,如小型實驗室的科研項目或臨床診斷的少量樣本檢測,96 孔板的熒光定量 PCR 儀就足夠,如伯樂的 CFX96。而對于高通量的檢測需求,如大規(guī)模的基因篩查、藥物研發(fā)中的大量樣本篩選,可能需要選擇 384 孔板的儀器,如 ABI 7900HT,能提高實驗效率,減少實驗成本。
熒光定量 PCR 儀是一種通過熒光染料或熒光標記的特異性探針,對 PCR 產(chǎn)物進行標記跟蹤,實時監(jiān)測反應過程的儀器。儀器特點:高靈敏度和特異性:能檢測極低拷貝數(shù)的核酸模板,對目標序列具有高度特異性,可減少假陽性和假陰性結(jié)果。準確 quantification:通過實時監(jiān)測熒光信號,實現(xiàn)對核酸模板的準確定量,結(jié)果準確可靠。高 throughput:可同時檢測多個樣品,大幅提高檢測效率,節(jié)省時間和成本。高度自動化:具備自動進樣、反應程序設置、數(shù)據(jù)采集和分析等功能,操作簡便,減少人為誤差。它們具有極低的噪聲水平和較高的量子效率,能夠檢測到極少量的熒光光子,從而實現(xiàn)對低豐度核酸的檢測。

熒光定量 PCR 儀是一種精密的儀器,正確的維護和保養(yǎng)可以延長其使用壽命,保證儀器的性能和檢測結(jié)果的準確性。定期維護:光路系統(tǒng)校準:根據(jù)儀器的使用頻率和廠家建議,定期對光路系統(tǒng)進行校準,以確保熒光信號檢測的準確性。校準過程通常需要使用標準熒光樣品和專業(yè)的校準工具,由專業(yè)技術人員進行操作。溫度校準:熒光定量 PCR 儀的溫度準確性對實驗結(jié)果至關重要。定期使用標準溫度計或溫度校準設備對反應模塊的溫度進行校準,確保各個孔位的溫度均勻性和準確性符合要求。一般建議每 3 - 6 個月進行一次溫度校準。更換耗材和部件:根據(jù)儀器的使用情況,定期更換易損耗材,如反應板、密封墊、移液器吸頭等。對于一些關鍵部件,如熒光檢測模塊的燈泡、濾光片等,按照廠家規(guī)定的使用壽命進行更換,以保證儀器的性能穩(wěn)定。軟件更新:及時更新儀器的控制軟件和數(shù)據(jù)分析軟件,以獲得更好的性能和功能,同時修復可能存在的軟件漏洞。在更新軟件前,要備份好重要的實驗數(shù)據(jù),防止數(shù)據(jù)丟失。核酸完整性:完整的核酸才能保證 PCR 反應正常進行。熒光定量PCR儀檢測
強度高且穩(wěn)定的光源能保證 TET 染料被充分激發(fā),而高靈敏度、低噪聲的探測器可準確捕捉微弱熒光信號。泰州Cy5熒光定量PCR儀型號
ROX原理:主要用于熒光定量 PCR 中的校正和歸一化。在反應體系中,ROX 的熒光強度相對穩(wěn)定,不受 PCR 反應過程的影響。通過檢測 ROX 的熒光信號,可以對其他熒光染料的信號進行校正,消除由于加樣誤差、反應體積差異、儀器波動等因素引起的熒光信號變化,提高定量結(jié)果的準確性和可靠性。特點:激發(fā)波長約為 570nm,發(fā)射波長約為 590nm,熒光顏色為紅色。ROX 通常與其他熒光染料如 FAM、VIC 等配合使用,在多重熒光定量 PCR 中,為每個反應孔提供一個穩(wěn)定的內(nèi)參熒光信號,以便對不同孔之間的熒光信號進行標準化處理。泰州Cy5熒光定量PCR儀型號