熒光定量 PCR 儀憑借 “快速檢測(cè)” 特性,成為臨床病原體診斷的重要設(shè)備。其速度優(yōu)勢(shì)源于兩方面:一是快速溫控系統(tǒng),通過(guò) Peltier 元件實(shí)現(xiàn)快速升降溫,將傳統(tǒng) PCR 的 2-3 小時(shí)擴(kuò)增時(shí)間縮短至 1 小時(shí)內(nèi);二是自動(dòng)化樣本處理,配套的核酸提取儀可實(shí)現(xiàn) “樣本裂解 - 核酸純化” 自動(dòng)化,與 PCR 儀聯(lián)動(dòng)形成 “樣本進(jìn) - 結(jié)果出” 的一體化流程。在臨床場(chǎng)景中,該儀器可 1-2 小時(shí)內(nèi)完成從樣本處理到結(jié)果輸出的全流程,例如檢測(cè):咽拭子樣本經(jīng) 30 分鐘核酸提取后,PCR 儀通過(guò) 40 個(gè)循環(huán)擴(kuò)增(約 1 小時(shí)),即可通過(guò)熒光信號(hào)判斷是否陽(yáng)性,相比傳統(tǒng)病毒培養(yǎng)法(需 3-5 天)大幅縮短診斷時(shí)間,為防控中的快速篩查提供支撐。在乙肝、丙肝等慢性病毒性肝炎診療中,儀器可定期監(jiān)測(cè)患者病毒載量,1 小時(shí)內(nèi)反饋結(jié)果,幫助醫(yī)生及時(shí)調(diào)整抗病毒治療方案,避免病情延誤。其快速性與準(zhǔn)確性的結(jié)合,使其成為臨床急診、傳染病防控等場(chǎng)景的 “剛需設(shè)備”。Texas Red 熒光定量 PCR 儀發(fā)射波長(zhǎng) 585-605nm,可與 FAM 等染料實(shí)現(xiàn)雙重?zé)晒鈾z測(cè),提升病原體共檢效率。南京Cy5熒光定量PCR儀要多少錢(qián)

選擇適合自己的熒光定量 PCR 儀,需要綜合考慮多個(gè)因素,實(shí)驗(yàn)類(lèi)型:如果是進(jìn)行常規(guī)的基因表達(dá)分析、病原體定量檢測(cè),普通的單通道或多通道熒光定量 PCR 儀即可滿足需求。例如,賽默飛世爾的 QuantStudio 3,適用于基礎(chǔ)的基因表達(dá)和病原體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。若是涉及到復(fù)雜的多重 PCR 實(shí)驗(yàn)、SNP 基因分型,則需要選擇具有更多熒光通道、更高分辨率的儀器,如羅氏的 LightCycler 480,可同時(shí)檢測(cè)多個(gè)熒光信號(hào),適用于多重分析。通量要求:根據(jù)實(shí)驗(yàn)樣本數(shù)量來(lái)選擇。對(duì)于樣本量較少的實(shí)驗(yàn),如小型實(shí)驗(yàn)室的科研項(xiàng)目或臨床診斷的少量樣本檢測(cè),96 孔板的熒光定量 PCR 儀就足夠,如伯樂(lè)的 CFX96。而對(duì)于高通量的檢測(cè)需求,如大規(guī)模的基因篩查、藥物研發(fā)中的大量樣本篩選,可能需要選擇 384 孔板的儀器,如 ABI 7900HT,能提高實(shí)驗(yàn)效率,減少實(shí)驗(yàn)成本。江蘇VIC熒光定量PCR儀價(jià)格實(shí)惠它們具有極低的噪聲水平和較高的量子效率,能夠檢測(cè)到極少量的熒光光子,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)低豐度核酸的檢測(cè)。

熒光標(biāo)記探針?lè)ㄔ恚菏褂靡环N特異性的熒光標(biāo)記探針,它能與目標(biāo) DNA 序列雜交。探針的 5' 端標(biāo)記有熒光報(bào)告基團(tuán),3' 端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán)。在游離狀態(tài)下,報(bào)告基團(tuán)發(fā)出的熒光會(huì)被淬滅基團(tuán)吸收,無(wú)法檢測(cè)到熒光信號(hào)。當(dāng) PCR 反應(yīng)進(jìn)行時(shí),DNA 聚合酶在延伸引物的過(guò)程中,會(huì)將探針?biāo)?,使?bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離,報(bào)告基團(tuán)發(fā)出的熒光信號(hào)就可以被儀器檢測(cè)到。每擴(kuò)增一條 DNA 鏈,就會(huì)有一個(gè)探針被水解,釋放出一個(gè)熒光信號(hào),熒光信號(hào)的強(qiáng)度與 PCR 產(chǎn)物的數(shù)量成正比。過(guò)程:在 PCR 反應(yīng)的退火階段,熒光標(biāo)記探針會(huì)與目標(biāo) DNA 序列特異性結(jié)合。在延伸階段,DNA 聚合酶的 5' - 3' 外切酶活性會(huì)將探針從 5' 端開(kāi)始逐個(gè)水解,使報(bào)告基團(tuán)游離出來(lái),產(chǎn)生熒光信號(hào)。儀器會(huì)在每個(gè)循環(huán)的延伸階段檢測(cè)熒光信號(hào)的強(qiáng)度,隨著 PCR 反應(yīng)的進(jìn)行,熒光信號(hào)逐漸增強(qiáng),同樣可以得到 Ct 值。定量依據(jù):與熒光染料法類(lèi)似,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)待測(cè)樣本的 Ct 值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出起始模板量。由于熒光標(biāo)記探針具有特異性,能與特定的目標(biāo)序列雜交,因此可以更準(zhǔn)確地對(duì)目標(biāo)基因進(jìn)行定量分析,減少非特異性擴(kuò)增的干擾。
VIC 熒光定量 PCR 儀內(nèi)置的 VIC 通道內(nèi)參校正系統(tǒng),通過(guò)在每個(gè)反應(yīng)體系中加入 VIC 標(biāo)記的內(nèi)參核酸(如管家基因或外源對(duì)照),可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè) PCR 擴(kuò)增過(guò)程中的抑制因素(如樣本中的抑制劑、核酸提取效率差異),避免因擴(kuò)增效率不一致導(dǎo)致的定量誤差。在病原體耐藥基因檢測(cè)中,例如肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶耐藥基因(KPC)檢測(cè),該儀器可同時(shí)檢測(cè) VIC 標(biāo)記的內(nèi)參基因和 FAM 標(biāo)記的 KPC 基因,通過(guò)內(nèi)參信號(hào)校正 KPC 基因的熒光信號(hào),實(shí)現(xiàn)耐藥基因的精細(xì)定量。臨床應(yīng)用中,該儀器可根據(jù) KPC 基因的拷貝數(shù)判斷細(xì)菌的耐藥程度,為臨床選擇提供依據(jù)。此外,該儀器支持內(nèi)參信號(hào)的自動(dòng)校正算法,無(wú)需人工干預(yù),檢測(cè)結(jié)果的重復(fù)性(CV 值 < 2%)和準(zhǔn)確性(回收率 95%-105%)均優(yōu)于無(wú)內(nèi)參校正的 PCR 儀,適合臨床診斷級(jí)別的耐藥基因檢測(cè)。TET 染料與核酸的結(jié)合具有較高的特異性和穩(wěn)定性,能夠在 PCR 反應(yīng)過(guò)程中準(zhǔn)確地指示目標(biāo)核酸的擴(kuò)增情況;

熒光熒光定量 PCR 儀的高靈敏度源于其優(yōu)化的熒光檢測(cè)系統(tǒng):采用高量子效率的 CCD 檢測(cè)器或光電倍增管,可捕捉單個(gè)熒光分子發(fā)出的信號(hào);同時(shí)通過(guò)窄帶濾光片減少背景光干擾,基線噪聲控制在 0.1 熒光單位以下,確保微弱信號(hào)可被有效識(shí)別。該特性使其比較低檢測(cè)限可達(dá) “單拷貝靶核酸”,能精細(xì)檢測(cè)低豐度樣本 —— 例如循環(huán) DNA(ctDNA)檢測(cè)中,ctDNA 在血液中含量為 1-100 拷貝 /mL,傳統(tǒng)檢測(cè)方法易漏檢,而該儀器可通過(guò)多次循環(huán)擴(kuò)增放大信號(hào),準(zhǔn)確捕捉 ctDNA 熒光信號(hào),為早期診斷提供可能。在病原體早期檢測(cè)中也發(fā)揮關(guān)鍵作用,如病毒(HIV)窗口期,患者體內(nèi)病毒載量極低,儀器可通過(guò)高靈敏度檢測(cè)提前 1-2 周檢出陽(yáng)性,縮短窗口期漏檢風(fēng)險(xiǎn)。此外,儀器還通過(guò) “陰性對(duì)照設(shè)置”“重復(fù)檢測(cè)驗(yàn)證” 等機(jī)制,進(jìn)一步確保低豐度樣本檢測(cè)結(jié)果的可靠性,避免假陰性誤判。TET 熒光定量 PCR 儀的熱循環(huán)系統(tǒng)能夠準(zhǔn)確地控制溫度的升降速率和保溫時(shí)間,PCR 反應(yīng)在溫度條件下進(jìn)行。蘇州定量熒光定量PCR儀品牌排行
定量熒光定量 PCR 儀的數(shù)據(jù)分析軟件具備 Ct 值自動(dòng)計(jì)算、熔解曲線分析功能,可自動(dòng)排除污染樣本。南京Cy5熒光定量PCR儀要多少錢(qián)
以下是判斷熒光定量 PCR 儀光路系統(tǒng)是否需要校準(zhǔn)的方法:熔解曲線異常峰形改變:熔解曲線的峰形變得不規(guī)則、寬化或出現(xiàn)多個(gè)峰,而樣品和實(shí)驗(yàn)條件均無(wú)變化時(shí),可能是光路系統(tǒng)對(duì)熒光信號(hào)的檢測(cè)精度下降,導(dǎo)致熔解曲線的分析結(jié)果不準(zhǔn)確,此時(shí)需要考慮對(duì)光路系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn)。Tm 值偏移:熔解曲線的 Tm 值(解鏈溫度)與預(yù)期值相比出現(xiàn)明顯偏移,且排除了引物設(shè)計(jì)、反應(yīng)條件等因素的影響,可能是光路系統(tǒng)的熒光檢測(cè)存在誤差,影響了對(duì) DNA 雙鏈解鏈過(guò)程的準(zhǔn)確監(jiān)測(cè),需要對(duì)光路進(jìn)行檢查和校準(zhǔn)。南京Cy5熒光定量PCR儀要多少錢(qián)