江蘇原料藥內(nèi)毒素檢測風(fēng)險評估

來源： 發(fā)布時間：2025-09-29

如何準(zhǔn)備樣品進行內(nèi)毒素檢測呢？測試前，需要根據(jù)樣品實際情況進行樣本前處理。大多數(shù)樣品只需要稀釋，使用內(nèi)毒素檢測試劑盒進行測試即可。如果樣品有蛋白酶干擾并導(dǎo)致假陽性結(jié)果，建議對樣品稀釋并70°C加熱5-15分鐘進行熱滅活處理。如需要，可以對滅活樣品進行進一步稀釋后檢測。如果樣品可能含有受β-葡聚糖，建議使用抗增液。β-葡聚糖可能來自酵母和纖維素材料。如果樣品中因含有內(nèi)毒素結(jié)合物而存在抑制，可以嘗試使用分散劑。
內(nèi)毒素檢測需關(guān)注制劑成分，螯合劑和表面活性劑可能誘發(fā)“低內(nèi)毒素回收（LER）”。江蘇原料藥內(nèi)毒素檢測風(fēng)險評估

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重組級聯(lián)試劑作為內(nèi)毒素檢測鱟試劑的理想替代方案，其具備的優(yōu)勢有：①優(yōu)化的G因子級聯(lián)反應(yīng)，無G因子旁路干擾。采用基因重組技術(shù)表達(dá)鱟血細(xì)胞中的C因子（Factor C）、B因子（Factor B）和凝固酶原（Proclotting enzyme），無G因子旁路干擾，排除1，3-β-D葡聚糖假陽性風(fēng)險。②依然采用動態(tài)顯色法原理，可沿用天然鱟試劑檢測設(shè)備。重組級聯(lián)試劑（rCR）,與天然鱟（動態(tài)顯色法）具有相同的操作流程、檢測設(shè)備、分析方法，用戶可以沿用天然鱟的儀器、軟件、耗材、人員培訓(xùn)、驗收程序等，無需投入額外成本。③具有與天然鱟的相同反應(yīng)機制，檢測結(jié)果具有等效性。完全模擬了天然鱟試劑的酶聯(lián)反應(yīng)，由3種蛋白組成的級聯(lián)反應(yīng)機制提供了信號放大的過程，確保了檢測的準(zhǔn)確性和靈敏度。湖州申科按照藥典要求進行替代方法驗證，無縫銜接技術(shù)轉(zhuǎn)移，助力用戶從方法驗證到工藝落地，從數(shù)據(jù)合規(guī)到全球申報。
浙江抗體藥物內(nèi)毒素檢測方法驗證湖州申科生物為內(nèi)毒素檢測提供替代方法驗證，包含重組級聯(lián)試劑（rCR）與天然鱟試劑的橋接數(shù)據(jù)。

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生物制品（如單抗、疫苗、重組蛋白）注射劑因直接進入人體，對細(xì)菌內(nèi)毒素殘留限值要求嚴(yán)苛（通常≤0.5 EU/mg 或更低），檢測面臨基質(zhì)復(fù)雜、干擾物質(zhì)多等挑戰(zhàn)。樣品中常見的蛋白質(zhì)、螯合劑、表面活性劑等可能抑制或增強 LAL 反應(yīng)，需通過預(yù)處理消除干擾：如采用稀釋法降低基質(zhì)濃度、添加中和劑（如 Mg2?）修復(fù)反應(yīng)體系，或使用熱滅活去除蛋白類干擾物。此外，生物制品生產(chǎn)全流程需進行內(nèi)毒素監(jiān)控，從細(xì)胞培養(yǎng)上清、純化中間品到終產(chǎn)品均需檢測，確保工藝去除內(nèi)毒素的有效性，符合 ICH Q6B 等法規(guī)對 “關(guān)鍵質(zhì)量屬性” 的控制要求。

隨著生物制藥行業(yè)的快速發(fā)展，注射用藥劑、疫苗等制劑及植入性醫(yī)療器械的生產(chǎn)需求激增，直接推動了內(nèi)毒素檢測試劑的市場需求。然而，傳統(tǒng)內(nèi)毒素檢測嚴(yán)重依賴天然鱟試劑，而全球鱟資源正面臨衰減危機。2021 年 2 月，我國國家林業(yè)和草原局、農(nóng)業(yè)農(nóng)村部聯(lián)合公告將鱟科動物列為國家二級保護動物，嚴(yán)格限制捕撈配額，導(dǎo)致天然鱟試劑價格持續(xù)上漲，甚至出現(xiàn)關(guān)鍵檢測環(huán)節(jié)的供應(yīng)短缺問題。在此背景下，湖州申科研發(fā)的重組級聯(lián)試劑（rCR）通過基因工程技術(shù)實現(xiàn)無動物源性生產(chǎn)，徹底擺脫對鱟血資源的依賴。該試劑支持 “減少、替代、優(yōu)化” 的 3R 動物保護原則，不僅解決了資源受限的行業(yè)痛點，還能保障長期穩(wěn)定供應(yīng)，為內(nèi)毒素檢測領(lǐng)域的可持續(xù)發(fā)展提供了理想解決方案。
湖州申科生物提供重組級聯(lián)方法的技術(shù)轉(zhuǎn)移服務(wù)，含方法驗證報告，助力內(nèi)毒素檢測方法平穩(wěn)切換。

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《中國藥典》對內(nèi)毒素檢測提出了非常嚴(yán)格的要求，以確保藥品的質(zhì)量和安全性。湖州申科生物提供一系列高質(zhì)量的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測產(chǎn)品，旨在為實驗室和工廠生產(chǎn)提供準(zhǔn)確、快速的檢測方案，產(chǎn)品涵蓋了凝膠法鱟試劑、動態(tài)顯色法鱟試劑、重組C因子法（rFC）和重組級聯(lián)試劑（rCR）、無熱原吸頭、內(nèi)毒素檢查用水、自動化設(shè)備、內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品、內(nèi)毒素指示劑等多種產(chǎn)品，滿足不同場景下的需求，同時可為復(fù)雜樣品基質(zhì)的內(nèi)毒素檢測提供解決方案。
內(nèi)毒素檢測的方法多樣性、多影響因素及實驗干擾，會導(dǎo)致自檢數(shù)據(jù)與廠家數(shù)據(jù)存在差異。江蘇合規(guī)性內(nèi)毒素檢測合規(guī)申報

表面活性劑會改變內(nèi)毒素活性，用重組級聯(lián)試劑檢測前需稀釋樣本，消除其對反應(yīng)的干擾。江蘇原料藥內(nèi)毒素檢測風(fēng)險評估

低內(nèi)毒素回收（LER）的主要形成機制之一是螯合劑與非離子表面活性劑的協(xié)同作用，直接影響內(nèi)毒素檢測結(jié)果。第一步，樣品中的螯合劑（如檸檬酸鹽）會去除二價陽離子（Mg2?、Ca2?），削弱 LPS 聚集體的鹽橋結(jié)構(gòu)，降低其剛性；第二步，表面活性劑（如吐溫 20）嵌入 LPS 分子，形成混合聚集體（膠體、層狀結(jié)構(gòu)），改變 LPS 的超分子形態(tài)。LPS 從 “可檢測態(tài)” 轉(zhuǎn)為 “不可檢測態(tài)”，導(dǎo)致鱟試劑中的 C 因子無法與內(nèi)毒素結(jié)合，內(nèi)毒素檢測出現(xiàn)假陰性。這種變化是時間依賴的，與稀釋度無關(guān)，給常規(guī)內(nèi)毒素檢測帶來獨特挑戰(zhàn)。
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