浙江合規(guī)性內(nèi)毒素檢測凝膠法鱟試劑

來源： 發(fā)布時間：2025-10-20

細菌內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁外膜釋放的脂多糖（LPS）成分，具有極強的生物活性，微量即可引發(fā)人體發(fā)熱、休克甚至多臟器功能衰竭。因此，在生物制品、醫(yī)療器械、制藥用水等領(lǐng)域，細菌內(nèi)毒素檢測是保障產(chǎn)品安全性的關(guān)鍵質(zhì)控環(huán)節(jié)。其檢測原理基于內(nèi)毒素與特定試劑的特異性反應(yīng)：內(nèi)毒素可活化鱟血變形細胞裂解物（LAL）中的凝血級聯(lián)反應(yīng)，通過C因子通路觸發(fā)酶促反應(yīng)，通過觀察凝膠形成、濁度變化或顯色強度實現(xiàn)定量或定性分析。目前，各國藥典均將內(nèi)毒素檢測列為強制要求，以降低臨床應(yīng)用中的熱原風(fēng)險。
脂質(zhì)體樣本用重組鱟試劑檢測，可稀釋或用 DMSO 裂解，釋放包裹的內(nèi)毒素以便檢出。浙江合規(guī)性內(nèi)毒素檢測凝膠法鱟試劑

浙江合規(guī)性內(nèi)毒素檢測凝膠法鱟試劑,內(nèi)毒素檢測

內(nèi)毒素檢測法規(guī)體系正逐步向非動物源試劑傾斜，為重組試劑的應(yīng)用鋪平道路。美國藥典（USP）已將重組 C 因子（rFC）和重組級聯(lián)試劑（rCR）正式收錄，于2025 年 5 月納入 USP-NF，明確要求用戶驗證重組試劑對特定產(chǎn)品的適用性。歐洲藥典（EP）通則 2.6.32 已收錄重組 C 因子法，規(guī)定注射用水和純化水可直接采用該方法檢測，復(fù)雜基質(zhì)樣品需通過驗證后使用。日本藥原則通過指導(dǎo)原則<G4-4-180>將重組蛋白試劑列為內(nèi)毒素檢測的補充方法。中國藥典雖暫未正式收錄重組方法，但 9251《細菌內(nèi)毒素法應(yīng)用指導(dǎo)原則》為其應(yīng)用提供了框架。這些法規(guī)進展共同構(gòu)建了重組試劑的合規(guī)應(yīng)用基礎(chǔ)。
北京非動物源內(nèi)毒素檢測抗干擾方案細菌內(nèi)毒素檢查法用鱟試劑檢測或量化革蘭陰性菌內(nèi)毒素，判斷供試品限量是否合規(guī)。

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2024年7月26日，《美國藥典》微生物委員會正式宣布，將第<86>章“使用重組試劑的細菌內(nèi)毒素測試”納入（USP-NF），該標(biāo)準(zhǔn)定于2025年5月正式生效。這一重要舉措不僅標(biāo)志著細菌內(nèi)毒素檢測領(lǐng)域從此正式邁入非動物源試劑的嶄新發(fā)展階段，更契合了全球生命科學(xué)領(lǐng)域遵循的3R原則（即通過非動物源技術(shù)替代動物實驗、減少實驗動物使用量、優(yōu)化實驗流程以降低動物痛苦）。此前傳統(tǒng)細菌內(nèi)毒素檢測多依賴從鱟血中提取的試劑，而鱟作為海洋瀕?！盎罨保滟Y源保護與檢測需求間的矛盾長期存在；如今重組級聯(lián)試劑（rCR）憑借技術(shù)創(chuàng)新成功替代傳統(tǒng)鱟血，在有效守護藍血鱟的生態(tài)未來、緩解資源依賴?yán)Ь车耐瑫r，也為藥品生產(chǎn)中的內(nèi)毒素質(zhì)量控制和用藥安全保障，提供了更先進、更穩(wěn)定且具備長期可持續(xù)性的解決方案。

重組試劑（rCR、rFC）是解決 LER 的重要工具，優(yōu)化內(nèi)毒素檢測性能。重組鱟試劑（rCR）通過基因工程表達 C、B 因子及凝固酶原，剔除 G 因子，完全模擬天然鱟級聯(lián)反應(yīng)，靈敏度達 0.005EU/mL，與天然方法橋接容易，能避免 LPS 結(jié)構(gòu)變化導(dǎo)致的假陰性；重組 C 因子（rFC）靈敏度 0.005-5EU/mL，性狀穩(wěn)定、均一性好，雖需熒光酶標(biāo)儀，但對部分 LER 場景（如無蛋白質(zhì)干擾）適配性強。二者擺脫了天然鱟試劑的局限，為內(nèi)毒素檢測提供更抗 LER 的選擇，契合行業(yè)技術(shù)趨勢。
天然鱟試劑依賴鱟血，資源短缺，重組試劑成內(nèi)毒素檢測未來趨勢。

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湖州申科生物細菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（CSE）源自大腸桿菌（E.coli O111:B4），經(jīng)過提取精制獲得脂多糖，并以細菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)標(biāo)定效價，每支效價處于 10 - 100EU ，量值準(zhǔn)確且可靠。在工業(yè)內(nèi)毒素檢測中，該標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用廣且關(guān)鍵。首先，能用于鱟試劑靈敏度復(fù)核實驗，幫助檢測人員準(zhǔn)確確認鱟試劑對細菌內(nèi)毒素的敏感程度，保障檢測方法的有效性；其次，可開展干擾試驗，評估樣品中可能存在的干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響，以便優(yōu)化檢測流程和方法；再者，能充當(dāng)各種陽性對照，為檢測過程提供參照，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性與可靠性。這款標(biāo)準(zhǔn)品不僅適用于凝膠法鱟試劑系列實驗，在光度法鱟試劑系列實驗中同樣能發(fā)揮重要作用。使用時，只需參照中國藥典2025版第四部通則 1143 的相關(guān)介紹進行操作即可。憑借效價標(biāo)定準(zhǔn)確和適用性的優(yōu)勢，該標(biāo)準(zhǔn)品為生物制品、化學(xué)藥品等各類樣品的細菌內(nèi)毒素檢測提供了穩(wěn)定且可靠的標(biāo)準(zhǔn)，助力企業(yè)和檢測機構(gòu)嚴(yán)格把控產(chǎn)品質(zhì)量，滿足法規(guī)要求。
內(nèi)毒素檢測的方法多樣性、多影響因素及實驗干擾，會導(dǎo)致自檢數(shù)據(jù)與廠家數(shù)據(jù)存在差異。江蘇血液制品內(nèi)毒素檢測LER現(xiàn)象

內(nèi)毒素干擾試驗回收率需在 50%-200%，驗證樣品基質(zhì)不影響內(nèi)毒素檢出。浙江合規(guī)性內(nèi)毒素檢測凝膠法鱟試劑

重組級聯(lián)試劑（rCR）通過完整模擬天然鱟試劑的酶促級聯(lián)反應(yīng)路徑，實現(xiàn)高效且特異的內(nèi)毒素檢測。其反應(yīng)機制為：內(nèi)毒素首先活化重組 C 因子，活化的 C 因子進一步活化重組 B 因子，隨后活化重組凝固酶原轉(zhuǎn)化為凝固酶，再催化顯色底物產(chǎn)生黃色信號（405nm 波長可檢測）。這一級聯(lián)放大過程有效提升了檢測靈敏度，即使微量內(nèi)毒素也能產(chǎn)生可識別信號。與單因子的重組 C 因子法（rFC）相比，rCR 的多因子級聯(lián)反應(yīng)抗干擾能力更強，尤其對復(fù)雜基質(zhì)樣品（如高蛋白單抗、疫苗）表現(xiàn)更優(yōu)。同時，rCR 剔除了天然鱟試劑中的 G 因子，避免了與 β-D 葡聚糖的非特異性反應(yīng)，從根本上減少假陽性結(jié)果，保障檢測數(shù)據(jù)的可靠性。
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