河北重組藥物支原體檢測核酸擴(kuò)增法

來源： 發(fā)布時間：2025-12-03

質(zhì)控結(jié)果是支原體 NAT 檢測可靠性的前提，需嚴(yán)格遵循判定標(biāo)準(zhǔn)，且需結(jié)合實驗室實際條件驗證適配的標(biāo)準(zhǔn)閾值。質(zhì)控樣品的判定規(guī)則明確：NTC（無模板對照）的 FAM 信號需 2 復(fù)孔 Ct≥40 或無明顯擴(kuò)增曲線，VIC 信號需 2 復(fù)孔 Ct<35 且呈有效 “S” 型擴(kuò)增；NCS（陰性對照）判定標(biāo)準(zhǔn)與 NTC 一致；PC（陽性質(zhì)控）的 FAM 信號需 2 復(fù)孔 Ct<35 且呈有效 “S” 型擴(kuò)增，PCS（陽性對照底物）判定標(biāo)準(zhǔn)與 PC 一致。只有質(zhì)控結(jié)果全部滿足要求，才能進(jìn)一步分析樣本結(jié)果，若質(zhì)控不達(dá)標(biāo)，需排查設(shè)備、試劑、操作等環(huán)節(jié)的問題并重新檢測。
支原體檢測需驗證專屬性，避免與革蘭氏陽性菌交叉反應(yīng)，確保結(jié)果準(zhǔn)確。河北重組藥物支原體檢測核酸擴(kuò)增法

河北重組藥物支原體檢測核酸擴(kuò)增法,支原體檢測

選擇合適的商業(yè)化支原體試劑盒需綜合五大主要維度，確保檢測合規(guī)、穩(wěn)定與高效。一是監(jiān)管認(rèn)可度，需關(guān)注試劑盒驗證的全面性與室間驗證情況，菌株選擇是否合規(guī)，以及廠家是否有豐富的客戶申報案例；二是廠家資質(zhì)，確認(rèn)廠家是否接受供應(yīng)商審計，能否提供 “產(chǎn)品 + 服務(wù)” 的全流程解決方案；三是產(chǎn)品設(shè)計，重點考察試劑盒方法學(xué)驗證的嚴(yán)謹(jǐn)性、對復(fù)雜樣品基質(zhì)的耐用性與抗干擾能力，以及是否具備避免假陰 / 假陽性的質(zhì)控設(shè)計，是否符合藥典要求；四是技術(shù)支持，評估廠家的技術(shù)響應(yīng)速度、問題解決能力，能否提供專業(yè)的驗證指導(dǎo)；五是質(zhì)量保障，關(guān)注試劑盒供應(yīng)的穩(wěn)定性與質(zhì)量均一性，避免因產(chǎn)品批次差異影響檢測結(jié)果，確保長期質(zhì)控需求的穩(wěn)定滿足。
湖北重組藥物支原體檢測培養(yǎng)法rHCDpurify 前處理系統(tǒng)可自動化提取支原體 DNA，減少人為誤差提升批間穩(wěn)定性。

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支原體檢測 NAT 方法驗證需滿足全球藥典對檢測限、專屬性、耐用性、可比性等關(guān)鍵指標(biāo)的要求，且 EP、USP 新草案提出更嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)。檢測限（LOD）方面，EP 要求針對每種支原體確定臨界值，需 3 次單獨 10 倍梯度稀釋、共 24 個檢測數(shù)據(jù)，95% 檢出濃度達(dá)標(biāo)；USP 要求標(biāo)準(zhǔn)菌株濃度≤10 CFU/mL 或 100 GC/mL，≥24 次檢測數(shù)據(jù)支持統(tǒng)計分析；ChP 未明確支原體專屬要求，但需滿足 “微生物檢出下限數(shù)量” 設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)。專屬性上，EP 建議測試革蘭氏陽性菌交叉污染，USP 要求生信分析與實際樣品驗證結(jié)合，ChP 強(qiáng)調(diào)外來成分不干擾試驗。耐用性方面，EP 需驗證試劑濃度、提取與反應(yīng)程序變化，USP 涵蓋設(shè)備、反應(yīng)體系等參數(shù)波動?？杀刃陨?，EP 要求 NAT 法與藥典法 LOD 及特異性對比，替代培養(yǎng)法需達(dá) 10 CFU/mL，替代指示細(xì)胞法需達(dá) 100 CFU/mL，USP 則視樣品基質(zhì)情況要求可比性研究。

MycoSHENTEK® 支原體 DNA 校準(zhǔn)品作為 NAT 檢測的關(guān)鍵輔助試劑，采用質(zhì)粒 DNA 制備，從根源上消除了污染風(fēng)險，使用更安全。該校準(zhǔn)品主要用于驗證支原體 NAT 檢測的靈敏度，以及校準(zhǔn)品濃度對數(shù)與 Ct 值的線性關(guān)系，為檢測方法的定量準(zhǔn)確性提供保障。產(chǎn)品采用 DNA 稀釋液進(jìn)行系列梯度稀釋，操作簡便高效，無需復(fù)雜預(yù)處理；同時具備極強(qiáng)的專屬性，不受其他種屬 DNA 干擾，耐用性突出，可在不同實驗條件下保持性能穩(wěn)定。其標(biāo)準(zhǔn)化的特性使其成為生物制品企業(yè)開展支原體檢測方法驗證、日常質(zhì)量控制校準(zhǔn)的理想選擇，助力檢測結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。
支原體檢測試劑盒批間穩(wěn)定性至關(guān)重要，需通過多批次驗證確保質(zhì)量均一。

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針對不同類型的樣品基質(zhì)，需采用定制化的支原體檢測前處理方案，以消除干擾、提升檢測效果。細(xì)胞懸液需經(jīng)熱處理、樣品處理液作用、細(xì)胞碎片去除、濃縮離心，再 55℃消化；上清或高濃度質(zhì)粒樣品需先濃縮離心，再用樣品處理液作用后 55℃消化；5% 人血白蛋白樣品則采用濃縮離心 + 樣品處理液作用 + 25℃消化的流程。常見干擾基質(zhì)包括凍存保護(hù)劑、高濃度細(xì)胞、代謝產(chǎn)物等，優(yōu)化前處理可遵循三大原則：提取前通過離心取上清或去除抑制劑預(yù)處理樣品；高濃度蛋白樣本提取時增加蛋白酶 K 用量，增強(qiáng)蛋白降解效果；細(xì)胞類樣品適當(dāng)降低細(xì)胞數(shù)或先裂解細(xì)胞，減少細(xì)胞基質(zhì)對檢測的干擾。
耐用性驗證需確認(rèn)方法參數(shù)微小變動時，支原體檢測結(jié)果不受影響。遼寧細(xì)胞療法產(chǎn)品支原體檢測快速檢測

細(xì)胞庫（MCB/WCB）需每 2-4 周監(jiān)測支原體，保障生產(chǎn)起始環(huán)節(jié)安全。河北重組藥物支原體檢測核酸擴(kuò)增法

AdvSHENTEK外源因子全自動核酸檢測分析系統(tǒng)憑借優(yōu)越性能，為支原體檢測提供堅實技術(shù)支撐。硬件方面，系統(tǒng)溫度運(yùn)行精度≤0.5℃，溫度波動控制在 ±0.5℃以內(nèi)，熒光強(qiáng)度 CV≤3%，確保檢測結(jié)果的重復(fù)性與準(zhǔn)確性；4 通道單獨運(yùn)行且支持同步檢測，通道可疊加延展，兼顧檢測效率與靈活性。軟件方面，系統(tǒng)具備三級權(quán)限管理、日志審計追蹤功能，完全符合 21CFR Part11 法規(guī)要求，支持 LIMS 系統(tǒng)連接、USB 數(shù)據(jù)導(dǎo)出及打印機(jī)直接打印，滿足企業(yè)合規(guī)追溯需求。此外，系統(tǒng)運(yùn)輸與儲存便捷，儀器可常規(guī)運(yùn)輸，檢測試劑盒在 2-8℃環(huán)境下即可穩(wěn)定保存，無需特殊冷鏈條件，進(jìn)一步提升了產(chǎn)品的實用性與適配性。
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