上海漢遜酵母宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測

宿主細(xì)胞蛋白（HCP）多與細(xì)胞關(guān)鍵功能相關(guān)，像細(xì)胞增殖、基因轉(zhuǎn)錄、蛋白合成修飾、細(xì)胞存活及凋亡等，工藝過程中會通過細(xì)胞分泌，或因細(xì)胞死亡、裂解而釋放。生產(chǎn)環(huán)節(jié)中，主要有三方面因素影響HCP的組成與豐度：①宿主細(xì)胞基因組調(diào)控及培養(yǎng)工藝：特定工藝下潛在HCP數(shù)量可能極多，且并非所有基因都會表達(dá)，部分基因的表達(dá)存在時間與條件差異；例如大腸桿菌約含4300個基因，不同工藝產(chǎn)物會經(jīng)歷獨特的翻譯后修飾，增加HCP的總數(shù)與生化復(fù)雜性。研究表明，大腸桿菌表達(dá)的蛋白存在數(shù)量差異，這可能是對環(huán)境條件的適應(yīng)性反應(yīng)，但85-90%有潛在免疫原性的HCP在不同發(fā)酵過程中均會出現(xiàn)。②產(chǎn)物表達(dá)方式：宿主細(xì)胞與外源基因、載體及輔助成分構(gòu)成的體系，可實現(xiàn)穩(wěn)定、瞬時及誘導(dǎo)表達(dá)；以大腸桿菌為例，常見的表達(dá)形式包括胞內(nèi)表達(dá)、分泌表達(dá)、可溶性表達(dá)、不溶性包涵體形式，以及融合與非融合表達(dá)。③純化步驟及產(chǎn)品自身特性：純化過程中能去除99%以上的HCP，但仍有殘留HCP保留在產(chǎn)品中，這些殘留HCP可能與產(chǎn)品結(jié)合，隨產(chǎn)品一同完成純化。

定制化試劑盒之所以成為宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測的優(yōu)先選擇，關(guān)鍵原因之一是其構(gòu)建的檢測體系更契合商業(yè)化生產(chǎn)中HCP工藝雜質(zhì)的控制需求。在HCP校準(zhǔn)品與HCP抗體這兩大關(guān)鍵試劑組分達(dá)標(biāo)后，定制化方法的建立與優(yōu)化會依托真實的純化中間品及原液樣品開展——通過優(yōu)化檢測條件提升對低濃度HCP的檢測靈敏度，從而滿足工藝驗證與過程控制的需求。臨床三期階段需對生產(chǎn)工藝開展系統(tǒng)驗證，以保障其穩(wěn)定性與可重復(fù)性，而定制化HCPELISA檢測方法能更準(zhǔn)確地監(jiān)測工藝中HCP的去除效果，為工藝驗證提供堅實支撐。過程控制環(huán)節(jié)，借助工藝特異型HCP ELISA檢測方法，可實時監(jiān)測生產(chǎn)過程中的HCP水平，擁有更強(qiáng)的生產(chǎn)異常預(yù)警能力，能及時排查生產(chǎn)風(fēng)險，保障產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。

為更優(yōu)管控工藝、保障產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，各國監(jiān)管機(jī)構(gòu)均要求提供所用宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測ELISA試劑盒的抗體覆蓋率數(shù)據(jù)。通常需開展覆蓋率分析的場景主要有以下四類：①臨床II期后，若仍使用商品化試劑盒，需評估其抗體覆蓋率是否能持續(xù)滿足質(zhì)量監(jiān)控需求；②臨床III期及后續(xù)階段，若產(chǎn)品研究者開發(fā)了平臺化或工藝專屬型HCP監(jiān)測方法，此類試劑盒使用前需評估其覆蓋率水平與商業(yè)化試劑盒覆蓋率水平的差異；③申報階段若未提交覆蓋率數(shù)據(jù)，監(jiān)管機(jī)構(gòu)可能向企業(yè)提出補(bǔ)充提交的要求；④產(chǎn)品上市后，若發(fā)生生產(chǎn)場地變更、工藝變更、HCP分析方法變更等情況，研究者需評估變更前后抗體覆蓋率水平的差異，以及該差異對藥品質(zhì)量與安全性的影響。

依據(jù)美國藥典 1132 章節(jié)規(guī)定，HCPs 校準(zhǔn)品需具備代表性，能夠覆蓋實際產(chǎn)品生產(chǎn)工藝中的 HCPs。結(jié)合 HCP 免疫檢測方法的使用目的與預(yù)期風(fēng)險管理需求，為滿足工藝開發(fā)、驗證需求，同時應(yīng)對下游工藝可能出現(xiàn)的異常失效或工藝變更情況，建議選用上游發(fā)酵工藝末端（如澄清處理后的工藝點）的樣本作為 HCPs 來源。實際制備時，可采用空細(xì)胞或空載細(xì)胞，在模擬實際工藝的預(yù)設(shè)條件下采集樣本，再通過二維電泳、高分辨率質(zhì)譜等蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，對模擬工藝與實際工藝下 HCPs 的代表性開展表征分析。越靠近下游工藝，HCPs 的蛋白種類越少，雖更接近成品（DS）中的 HCPs，但這類樣本可能無法滿足工藝開發(fā)與驗證需求，也難以覆蓋工藝潛在風(fēng)險，因此通常不推薦使用，或只作為上游工藝 HCPs 免疫檢測方法的輔助材料。

由于 HCPs 屬于復(fù)雜的多分析物，為制備覆蓋率盡可能高的抗體（以覆蓋工藝特有的高風(fēng)險 HCPs），需采用可靠的免疫策略。獲得符合性能要求的抗體后，需借助經(jīng)過驗證的 2D 或 LC-MS 方法對抗體覆蓋率進(jìn)行表征，確?？贵w可充分覆蓋各實際工藝下產(chǎn)生的 HCPs。在擁有代表性抗原與優(yōu)良性能抗體的基礎(chǔ)上，開展 ELISA 檢測體系開發(fā)，涵蓋原輔料篩選與制備研究、各組分工藝及反應(yīng)體系研究、穩(wěn)定性研究等重要內(nèi)容。檢測體系開發(fā)完成后，需依據(jù) ICH 及藥典要求開展分析方法驗證評估，確保體系的線性、范圍、檢測限、定量限、準(zhǔn)確度、精密度、專屬性及耐用性均滿足法規(guī)要求。

湖州申科生物專注于提供契合嚴(yán)苛法規(guī)要求的宿主細(xì)胞蛋白（HCP）ELISA 檢測試劑盒，主要目標(biāo)是滿足抗體藥、疫苗等生物制品在 IND/BLA 申報階段的監(jiān)管標(biāo)準(zhǔn)。為實現(xiàn)這一目標(biāo)，公司搭建了全流程依規(guī)開發(fā)的質(zhì)量管控體系 —— 整個開發(fā)過程嚴(yán)格遵循 ISO 13485 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，同時能充分滿足用戶審計需求，從體系層面保障產(chǎn)品合規(guī)性。其開發(fā)流程包含三大關(guān)鍵階段，前兩大基礎(chǔ)階段聚焦關(guān)鍵物料的品質(zhì)把控：一是 HCP 殘留定量檢測參考品開發(fā)，重點是構(gòu)建可靠的 HCP 抗原參考品，需完成抗原表征、量值溯源與賦值、均一性驗證及穩(wěn)定性考察等工作，為檢測準(zhǔn)確性與樣品代表性奠定基礎(chǔ)；二是高質(zhì)量大批量抗體制備，通過優(yōu)化的 HCP 抗原動物免疫策略，搭配嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目贵w質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（含標(biāo)準(zhǔn)制定、覆蓋率驗證）與穩(wěn)定的制備工藝，生產(chǎn)出高特異性、廣覆蓋度的檢測抗體，確保后續(xù)檢測的特異性與靈敏度。