上海復(fù)雜基質(zhì)支原體檢測(cè)NAT法

來(lái)源： 發(fā)布時(shí)間：2025-12-04

支原體檢測(cè) NAT 方法驗(yàn)證需滿足全球藥典對(duì)檢測(cè)限、專(zhuān)屬性、耐用性、可比性等關(guān)鍵指標(biāo)的要求，且 EP、USP 新草案提出更嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)。檢測(cè)限（LOD）方面，EP 要求針對(duì)每種支原體確定臨界值，需 3 次單獨(dú) 10 倍梯度稀釋、共 24 個(gè)檢測(cè)數(shù)據(jù)，95% 檢出濃度達(dá)標(biāo)；USP 要求標(biāo)準(zhǔn)菌株濃度≤10 CFU/mL 或 100 GC/mL，≥24 次檢測(cè)數(shù)據(jù)支持統(tǒng)計(jì)分析；ChP 未明確支原體專(zhuān)屬要求，但需滿足 “微生物檢出下限數(shù)量” 設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)。專(zhuān)屬性上，EP 建議測(cè)試革蘭氏陽(yáng)性菌交叉污染，USP 要求生信分析與實(shí)際樣品驗(yàn)證結(jié)合，ChP 強(qiáng)調(diào)外來(lái)成分不干擾試驗(yàn)。耐用性方面，EP 需驗(yàn)證試劑濃度、提取與反應(yīng)程序變化，USP 涵蓋設(shè)備、反應(yīng)體系等參數(shù)波動(dòng)?？杀刃陨希珽P 要求 NAT 法與藥典法 LOD 及特異性對(duì)比，替代培養(yǎng)法需達(dá) 10 CFU/mL，替代指示細(xì)胞法需達(dá) 100 CFU/mL，USP 則視樣品基質(zhì)情況要求可比性研究。
支原體檢測(cè)取樣需按產(chǎn)品體積設(shè)計(jì)，10-1000mL 樣品取總體積 1%，保障結(jié)果代表性。上海復(fù)雜基質(zhì)支原體檢測(cè)NAT法

上海復(fù)雜基質(zhì)支原體檢測(cè)NAT法,支原體檢測(cè)

2023 年美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院（NIH）的對(duì)比研究得出一個(gè)結(jié)論是并非所有商業(yè)化支原體檢測(cè)試劑盒都能滿足替代傳統(tǒng)方法的要求，研究對(duì)市面上 5 款主流試劑盒（ATCC、梅里埃、賽默飛、羅氏、MB）進(jìn)行測(cè)試，發(fā)現(xiàn)不同試劑盒對(duì)不同支原體菌株的檢測(cè)靈敏度差異明顯，部分產(chǎn)品無(wú)法達(dá)到宣稱的≤10 CFU/mL 檢測(cè)限（符合歐、日藥典替代培養(yǎng)法的要求）。例如，ATCC 試劑盒對(duì)萊氏無(wú)膽甾原體、精氨酸支原體的檢測(cè)限只為 100 CFU/mL，MB 試劑盒對(duì)硬蜱螺原體無(wú)法檢出（>1000 CFU/mL）。這一現(xiàn)象表明，試劑盒的檢測(cè)性能與支原體菌株特性密切相關(guān)，因此企業(yè)需根據(jù)待測(cè)樣品的原輔料來(lái)源和檢測(cè)目的，對(duì)試劑盒進(jìn)行嚴(yán)格的性能驗(yàn)證，避免因檢測(cè)限不達(dá)標(biāo)導(dǎo)致質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)。
遼寧干細(xì)胞產(chǎn)品支原體檢測(cè)驗(yàn)證菌株EP 新規(guī)明確支原體驗(yàn)證菌株 GC/CFU 比值＜10，需在指數(shù)階段收獲以保障活性與分散性。

上海復(fù)雜基質(zhì)支原體檢測(cè)NAT法,支原體檢測(cè)

湖州申科構(gòu)建了具有完備資質(zhì)的支原體技術(shù)服務(wù)平臺(tái)，為企業(yè)提供多元化支持。平臺(tái)擁有 BSL-2/P2 微生物實(shí)驗(yàn)室備案資質(zhì)，遵循 GMP-like 質(zhì)量體系，具備支原體培養(yǎng)法、指示細(xì)胞法與 qPCR 法的檢測(cè)及驗(yàn)證能力，配備符合藥典要求的支原體標(biāo)準(zhǔn)菌株庫(kù)與高靈敏度培養(yǎng)基（含液體、固體、半流體）。企業(yè)已通過(guò) ISO13485:2016 質(zhì)量管理體系認(rèn)證（證書(shū)號(hào) MD 709873），檢測(cè)中心獲得 CNAS 認(rèn)證（注冊(cè)號(hào) CNAS L21942），符合 ISO/IEC 17025:2017 標(biāo)準(zhǔn)，具備國(guó)際互認(rèn)資質(zhì)。平臺(tái)可提供多元化技術(shù)服務(wù)，包括支原體 qPCR 法檢測(cè)能力建立、實(shí)驗(yàn)員能力考核、質(zhì)量體系與流程搭建、實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)方案優(yōu)化，以及樣品檢測(cè)（三種方法）、樣品適用性驗(yàn)證、方法學(xué)驗(yàn)證、傳統(tǒng)法與 qPCR 法比對(duì)、特殊菌株定制生產(chǎn)等，申報(bào)階段可配合客戶與監(jiān)管機(jī)構(gòu)完成現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)。

MycoSHENTEK® 支原體 DNA 校準(zhǔn)品作為 NAT 檢測(cè)的關(guān)鍵輔助試劑，采用質(zhì)粒 DNA 制備，從根源上消除了污染風(fēng)險(xiǎn)，使用更安全。該校準(zhǔn)品主要用于驗(yàn)證支原體 NAT 檢測(cè)的靈敏度，以及校準(zhǔn)品濃度對(duì)數(shù)與 Ct 值的線性關(guān)系，為檢測(cè)方法的定量準(zhǔn)確性提供保障。產(chǎn)品采用 DNA 稀釋液進(jìn)行系列梯度稀釋?zhuān)僮骱?jiǎn)便高效，無(wú)需復(fù)雜預(yù)處理；同時(shí)具備極強(qiáng)的專(zhuān)屬性，不受其他種屬 DNA 干擾，耐用性突出，可在不同實(shí)驗(yàn)條件下保持性能穩(wěn)定。其標(biāo)準(zhǔn)化的特性使其成為生物制品企業(yè)開(kāi)展支原體檢測(cè)方法驗(yàn)證、日常質(zhì)量控制校準(zhǔn)的理想選擇，助力檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。
高濃度質(zhì)粒樣品在進(jìn)行支原體檢測(cè)時(shí)，需通過(guò)濃縮離心預(yù)處理，提升支原體檢出率。

上海復(fù)雜基質(zhì)支原體檢測(cè)NAT法,支原體檢測(cè)

湖州申科的支原體驗(yàn)證菌株以高穩(wěn)定性與合規(guī)性為重點(diǎn)優(yōu)勢(shì)，滿足 NAT 方法驗(yàn)證需求。菌株來(lái)源可靠，均取自國(guó)內(nèi)外合規(guī)機(jī)構(gòu)驗(yàn)證菌株標(biāo)準(zhǔn)盤(pán)，溯源至美國(guó) ATCC（口腔、肺炎支原體）、中國(guó) CVCC（豬鼻支原體）等正規(guī)保藏機(jī)構(gòu)，獲正式商用授權(quán)，標(biāo)定濃度涵蓋 10CFU 與 100CFU。生產(chǎn)環(huán)境合規(guī)，在 BSL-2 生物安全實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展，符合國(guó)家生物安全法標(biāo)準(zhǔn)，針對(duì)不同菌株特性逐個(gè)優(yōu)化生產(chǎn)工藝，涵蓋超 10 種菌株的主代與工作代。質(zhì)控環(huán)節(jié)嚴(yán)謹(jǐn)，采用高靈敏度培養(yǎng)基（液體、固體、半流體），保障菌落易觀察分離與 CFU 計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性；凍存前后均通過(guò)固體平皿培養(yǎng)法測(cè)定 CFU，聯(lián)合合規(guī)機(jī)構(gòu)建立數(shù)字 PCR 標(biāo)定方法，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室間對(duì)比驗(yàn)證，準(zhǔn)確監(jiān)控 GC/CFU 比，確保菌株質(zhì)量達(dá)標(biāo)。
全血基質(zhì)中100 CFU/mL支原體，湖州申科支原體檢測(cè)試劑盒通過(guò)優(yōu)化提取流程實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定擴(kuò)增與檢出。陜西復(fù)雜基質(zhì)支原體檢測(cè)試劑盒

湖州申科已為多家頭部企業(yè)提供支原體檢測(cè)方案，支持 BLA/NDA 申報(bào)。上海復(fù)雜基質(zhì)支原體檢測(cè)NAT法

湖州申科構(gòu)建了覆蓋全領(lǐng)域、全場(chǎng)景的支原體檢測(cè)一站式合規(guī)解決方案。產(chǎn)品矩陣豐富，包括支原體 DNA 提取純化試劑盒（2G）、檢測(cè)試劑盒（2G，PCR - 熒光探針?lè)ǎ?、DNA 校準(zhǔn)品、一體化檢測(cè)卡盒、外源因子全自動(dòng)核酸分析系統(tǒng)，以及 10 余種支原體驗(yàn)證菌株（已上市豬鼻、肺炎、口腔支原體等，即將上市發(fā)酵、精氨酸支原體等）。方案具備極強(qiáng)的場(chǎng)景適配性，可應(yīng)對(duì) 5% 人白、高濃度細(xì)胞等復(fù)雜基質(zhì)樣品，支持從起始材料到終產(chǎn)品的全流程檢測(cè)，滿足細(xì)胞療法、抗體、疫苗、CRO/CDMO 等不同領(lǐng)域的檢測(cè)需求。服務(wù)層面，提供從方法學(xué)建立、樣品檢測(cè)、適用性驗(yàn)證、傳統(tǒng)法與 qPCR 法比對(duì)到特殊菌株定制的全流程技術(shù)支持，配合企業(yè)完成監(jiān)管機(jī)構(gòu)現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)，滿足企業(yè)從 IND 到 BLA/NDA 的申報(bào)需求，實(shí)現(xiàn) “極簡(jiǎn)操作、一步加樣、避免污染、全量檢測(cè)” 的價(jià)值。
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