重慶重組藥物支原體檢測NAT法

來源： 發(fā)布時間：2025-12-05

支原體檢測中，污染引發(fā)的假陽性是生物制品企業(yè)的痛點。實驗室環(huán)境控制不當、人員操作不規(guī)范、儀器耗材混用等因素，都可能導致核酸氣溶膠污染或上樣污染，進而影響檢測結果。一旦出現(xiàn)假陽性，企業(yè)需花費大量時間排查驗證，嚴重時會導致批次報廢、影響其他產品正常生產。常規(guī) NAT 檢測法雖比傳統(tǒng)培養(yǎng)法快速，但仍存在明顯短板：需配備前處理設備、PCR 儀器等多重耗材，核酸提取、PCR 上機、高濃度產物處理等多個環(huán)節(jié)均有污染風險；實驗準備需 40-60 分鐘，操作耗時超 4 小時，每天只能完成 1-2 輪單一類型樣本檢測，且對場地和人員技能要求極高，需單獨劃分試劑準備區(qū)、樣品制備區(qū)等多個區(qū)域，人力與場地成本高昂。
支原體檢測是生物制品質量控制的關鍵環(huán)節(jié)，需兼顧合規(guī)性與檢測效率。重慶重組藥物支原體檢測NAT法

重慶重組藥物支原體檢測NAT法,支原體檢測

針對新型生物制品中 10?細胞基質、全血、1mg/mL 高濃度質粒、5% 人白等特殊復雜樣品基質，MycoSHENTEK® 支原體 qPCR 檢測試劑盒（2G）進行了方法性能驗證，展現(xiàn)出極強的樣品適用性。實驗數(shù)據(jù)顯示，在 CHO-S&Vero 細胞（10?個）、5% 人血白蛋白、全血等基質中，該試劑盒對 10 CFU/mL 或 100 CFU/mL 的支原體均能穩(wěn)定檢出，擴增曲線清晰可靠。其優(yōu)化的前處理流程與檢測體系有效規(guī)避了復雜基質的干擾，無需額外傳代步驟，徹底解決了傳統(tǒng)方法在復雜樣品檢測中易受抑制、結果不準的問題，覆蓋病毒、培養(yǎng)液、成品等多種樣品類型。
四川生物制品支原體檢測使用性驗證細胞庫（MCB/WCB）需每 2-4 周監(jiān)測支原體，保障生產起始環(huán)節(jié)安全。

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全球主流藥典對支原體 NAT 檢測的標準菌株選擇形成了明確共識，中國、歐洲、美國、日本四國藥典一致推薦優(yōu)先使用豬鼻支原體、口腔支原體、肺炎支原體三種菌株，用于 NAT 方法檢測限的驗證，這一選擇基于支原體的污染發(fā)生頻率與進化關系。不同地區(qū)法規(guī)的驗證范圍略有差異：EP、USP、ChP 要求覆蓋特異性、檢測限、耐受性，WHO 還需包含半定量與定性實驗；部分地區(qū)如歐洲藥典額外納入萊氏無膽甾原體、滑液支原體等菌株，針對昆蟲和植物來源物料生產場景則需關注螺原體等特殊菌株。合規(guī)的標準菌株是 NAT 檢測方法驗證的前提，其溯源性與授權資質直接影響檢測結果的認可度。

MycoSHENTEK® 支原體 DNA 檢測試劑盒參照 EP 2.6.7 和 JP XVII 支原體檢測相關要求完成全面性能驗證，是經過三方室間驗證、性能完全符合藥典標準的支原體檢測試劑盒。該試劑盒檢測靈敏度高達 10CFU/mL，可同時替代傳統(tǒng)培養(yǎng)法與指示細胞培養(yǎng)法，大幅縮短檢測周期。經實驗驗證，其對雞滑液支原體、豬鼻支原體、萊氏無膽甾支原體等多種常見污染菌株的檢出率均達到 100%（24/24），即使對口腔支原體等低濃度菌株，檢出率也滿足 95% 以上。憑借覆蓋范圍廣、靈敏度高、性能穩(wěn)定、合規(guī)性強的關鍵優(yōu)勢，該試劑盒為生物制品企業(yè)提供了高效、可靠的支原體檢測工具，助力企業(yè)滿足全球監(jiān)管要求并保障產品質量。
申科依托 CNAS 認證實驗室提供支原體檢測服務，可配合監(jiān)管機構現(xiàn)場審計，確保合規(guī)性。

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長期以來，支原體檢測主要依賴培養(yǎng)法和指示細胞法，且法規(guī)通常要求兩種方法同時使用，但這兩類方法存在明顯短板——培養(yǎng)法檢測周期長達 28 天，指示細胞法也需較長時間等待結果。隨著細胞療法藥物快速發(fā)展，其上市周期短、貨架期有限的特點，使得傳統(tǒng)方法難以滿足藥物放行的時效要求。核酸擴增技術（NAT）尤其是熒光探針 qPCR 檢測方法的出現(xiàn)，憑借檢測速度快、特異性強的優(yōu)勢，成為支原體檢測的理想替代方案。作為替代方法，NAT 檢測需通過嚴格驗證以達到法規(guī)要求的靈敏度：檢測限達到 10CFU/mL 可替代培養(yǎng)法，達到 100CFU/mL 可替代指示細胞培養(yǎng)法，從而實現(xiàn)快速且可靠的支原體篩查。
湖州申科提供支原體檢測技術培訓，助力實驗室提升檢測能力與合規(guī)水平。廣東干細胞產品支原體檢測技術服務

支原體檢測結果判定需結合 FAM 與 VIC 信號，警惕基質抑制導致的誤判。重慶重組藥物支原體檢測NAT法

污染防控是支原體 NAT 檢測的重要環(huán)節(jié)，需建立全流程規(guī)范，從實驗室布局、準備工作、實驗操作到廢棄物處理層層把關。實驗室需嚴格分區(qū)并做好明顯標識，包括試劑準備區(qū)（陰性試劑配制）、標曲配制區(qū)（超凈臺內操作）、樣本制備區(qū)（樣本分裝與提?。⒛０寮訕訁^(qū)（純化產物加樣）、PCR 擴增區(qū)（擴增產物盡量不開蓋），各區(qū)域配備單獨的移液器、Tip 頭、實驗服等耗材。實驗前需穿戴整齊手套與實驗服，用 75% 酒精棉擦拭消毒工作臺及設備，準備好含消毒液的廢液缸。操作過程遵循 “先陰后陽” 原則，建議使用自動化設備提取，提取后盡快轉移純化液。廢棄物需規(guī)范處理，倒入醫(yī)療垃圾袋統(tǒng)一處置，廢液缸經消毒液處理后用清水沖洗干凈。
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